文章来源:检验医学
《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》
申报、资料审核、现场验收、整改、通知审核结果。
室内质控(重复性)和室间质评(准确度)。
Kary Mullis。
脱氧核糖核酸(ATCG)和核糖核酸(AUCG)。
DNA⇔RNA⇒蛋白质。
试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
260nm
260/280nm
细胞游离DNA,ctDNA是指循环肿瘤DNA。
经国家药监局批准。
“鹅口颈”套扎结扎。
3/4
使用EDTA或枸橼酸盐抗凝,不使用肝素抗凝。
荧光基团和淬灭基团。
在Ⅱ级生物安全实验室开展,同时采用生物安全Ⅲ级实验室的个人防护。
变性、退火、延伸。
核苷酸,其组成包括碱基、核糖或脱氧核糖和磷酸。
碱基A-T之间以两个氢键相连,G-C以三个氢键相连。
加入尿苷糖基酶(UNG)具有防“污染”作用。
实验室环境、实验用品如吸头、离心管等、实验人员的手。
四个等级。
蒸发、探针水解、相邻荧光通道干扰等。
DEPC(焦碳酸二乙酯)。
前者含有:ddNTP
5%
密闭、一次性、无DNase和RNase、无菌。
强抑制剂。
假阴性、假阳性。
FAM,TET, VIC, HEX。
常规应用前、常规使用期间(定期)、更换试剂、仪器、校准品溯源性改变、仪器搬迁、设施、环境严重失控等
弱阳性质控(浓度为检测限2-4倍),阳性质控,阴性质控品。
(1)核酸提取中的随机误差,如核酸提取中的丢失,有机溶剂的去除不彻底,标本中扩增抑制物的残留,所用耗材如离心管有PCR抑制物等。
(2)仪器的问题,如扩增仪孔间温度的不一致性,孔内温度与所示温度的不一致性等。
(3)试剂的问题,如Taq酶和/或反转录酶的失活,探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。
(1)扩增产物的污染
(2)临床标本的核酸提取过程中发生的样本间的交叉污染。
(3)喷枪等关键耗材污染
(4)试剂污染
(5)仪器故障
(1)开窗通风
(2)用次氯酸钠溶液清洗地面,实验台、墙面
(3)增加紫外灯照射时间
(4)用75%乙醇空中喷雾等方法去除
(5)每天进行上述过程,直到污染消除。
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