PRRS病毒的一种可能的传播途径是从受感染的公猪通过精液传播。要降低这种传播风险的一个关键是在公猪场制定科学的监测计划。PCR可用于确定公猪样本中是否存在病毒,但选择样本类型可能是成功的关键点之一。
公猪PRRS病毒的感染和排毒具有以下特性:
血液中检测到病毒的时间比精液更早。
排毒不稳定性:在病毒血症公猪的精液中常常监测不到病毒。
排毒间歇性:排毒阶段可持续数月。
由于精液特性(例如PCR抑制剂的存在),因此很难进行PCR检测。
因此理想的样本是采血,但由于穿刺部位有静脉炎的风险,常规或频繁地通过股静脉采血会给公猪带来健康问题。
照片 1.采精期间的股骨穿刺。
为了减少这个问题,考虑可能的替代方法,例如:
鼻拭子或口腔拭子
用低规格针头穿刺,然后用不含培养基的拭子采集血液
照片 2.耳静脉穿刺。
照片 3.用拭子从耳静脉取样。
为了评估在公猪监测计划中精液带毒的可能样本和技术的有效性,特使用PCR技术从感染PRRS病毒的猪场的30头公猪的以下不同样本中来检测阳性和病毒载量:
通过股静脉穿刺使用真空管进行常规采血(照片 1)。
通过在耳静脉中微刺并将拭子引入0.5ml无菌盐水溶液中获得的血拭子(照片3)。
通过耳静脉微穿刺获得的血液样本的 FTA 卡(照片 4)。®
口腔或唾液拭子。
未稀释的精液。
照片 4.FTA®卡抽样。
实验结果:
93%的公猪在常规股静脉血液采样中呈阳性。
90%的公猪用微穿刺血拭子检测呈阳性。病毒载量低于通过血管获得的病毒载量,一头公猪在常规抽血中呈阳性,在拭子中呈阴性。
25%的精液样本检测呈阳性。精液阳性的公猪都是病毒血症,也是血液病毒载量最高的公猪。与同一头公猪的血液病毒载量相比,精液病毒载量较低。
33%的公猪经口腔拭子检测呈阳性。 阳性的病毒载量低于血液病毒载量。
23%的FTA卡呈阳性,病毒载量低。与精液样本一样,使用FTA卡检测呈阳性的动物在常规方法获得的血液样本中的病毒载量最高。
图 1.按样本类型划分的阳性样本百分比及其平均 40-Ct。
图 2.按样本类型划分的阳性样本的病毒载量。
结论和展望
为了及早发现病毒的存在,仅基于精液采样的程序会延迟病毒检测。
精液样本中的低病毒载量会导致假阴性PCR结果,具体取决于收集的精液稀释度、收集样本的均质性、PCR试剂盒的检测能力、使用的PCR方案等因素。
通过微穿刺获得的血拭子可以很好地替代传统的血液采样。未来的研究可以根据用于实现更高血液吸收的拭子类型以及引入拭子以减少稀释的无菌盐水量来确定如何提高检测能力。
根据这项研究的结果,FTA 卡似乎不是一种好的样本类型,尽管当血液病毒载量高时能检测到阳性,重点是改进采样方案和从卡中提取血液成分的研究。
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