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做实验时经常懵逼和违规操作怎么办?

最好的解决办法就是写实验计划

你懵逼和违规操作是因为你对原理没有弄透对操作流程不熟悉

那你就将操作步骤写得细到极致

然后,你得让做过的人和懂的人给你改,这个人通常是老师!通常会给你提出很多问题!

最后做实验之前默写你的操作步骤,想象自己真的在做实验,在脑海中反复你的操作

实在不行,你就拿一些便宜的替代物做模拟实验

最后,可以把操作步骤打出来,放在旁边,对着你的操作步骤一步步做实验,基本就不会出错了!

我最开始跟着师兄细胞的时候,一点儿不懂,总错,我就写了非常详细的操作步骤,然后在脑子里不断重复,结果就顺利学会了,只是开始操作慢,熟悉了就快!这是我之前写的操作步骤:

·传代
1.准备
(1)实验前30min,打开紫外灯,正式实验时关闭紫外灯,打开风机
(2)穿实验服,戴手套,酒精擦手,擦拭培养基瓶、PBS瓶、胰酶瓶、血清瓶以及废液缸外壁,放入超净台
2.弃液
(1)取出培养瓶(皿),酒精擦拭外壁,放入超净台
(2)酒精擦手,进入超净台
(3)开盖,将盖至于火焰正前方,右手将培养液倒入废液缸
(4)培养基盖(皿)过火,盖上培养瓶(皿)
3. 冲洗
(1)取5ml枪,安装5ml枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用
(2)取PBS,撕下封口膜,过火,开盖,盖置于高处
(3)取5ml枪,取2ml左右PBS,加入培养皿或培养瓶中
(4)盖上瓶盖(皿盖),弃掉枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用,轻轻晃动培养瓶(皿),让PBS没过瓶底
(5)开盖,右手弃掉PBS
(6)瓶盖(皿盖)过火,盖上培养瓶(皿)
(7)PBS瓶盖瓶口过火,盖上PBS瓶盖,置于左手酒精灯旁
4. 消化
(1)取5ml枪头,安装5ml枪头,调节示数为2ml,枪头朝向对面,置于左手边枪头盒上备用
(2)取胰酶瓶,撕封口膜,瓶口过火后开盖,盖置于高处
(3)取5ml枪,取2ml胰酶,分别小心(不要直接打到细胞上)加入到各培养瓶中(个数据情况而定),计时2min
(4)带着5ml枪头,将5ml枪,枪头朝向对面,置于左手边枪头盒上备用
(5)胰酶瓶口和瓶盖过火后盖好,同PBS置于左手酒精灯旁
(6)将培养瓶盖(皿盖)过火后盖上
5. 取管
(1)右手拿出铝制饭盒,左手打开
(2)镊子过火,取出一支15ml离心管和离心管盖(传代+铺板的话就得取出多只离心管),置于离心管架中
(3)用手离心管盖轻轻放在离心管上,不用拧紧
6. 终止消化
(1)取1ml枪,安装1ml枪头,置于左手边备用(如果血清太少,枪头伸不进去,就用5ml枪头取血清)
(2)取血清,撕下封口膜,过火,开盖置于离心管架中备用,盖置于高处
(3)打开培养瓶盖
(4)取1ml枪,取几滴血清,加入到培养瓶(皿)中,终止消化
(5)枪头朝对面,将1ml枪置于左手边枪头盒上备用
(6)过火,盖上血清
7. 吹打
(1)打开备用的15ml离心管的盖,盖置于高处
(2)取1ml枪,吹打悬液,轻轻从培养瓶上方将悬液打出,让其自然流到培养瓶下方
(3)认真观察培养瓶壁的膜,吹打到膜消失为止
(4)吹打完成之后将培养瓶中悬液转移到备用的15ml离心管中
(5)弃掉枪头,将枪放回枪架上
(6)管盖过火之后将装有细胞悬液的离心管盖上
8. 离心
(1)用封口膜将装有细胞悬液的离心管封口
(2)拿出超净台配平
(3)1500rpm离心5min
9. 洗瓶
(1)酒精擦拭双手,进入超净台工作区
(2)取1ml枪,安装1ml枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用
(3)取PBS瓶,瓶盖过火开盖
(4)取1ml枪,取1-2mlPBS,加至培养瓶(皿)中,冲洗3次后倒掉冲洗液
(5)将培养瓶盖(皿盖)过火后盖上
(6)弃掉枪头,枪放回枪架上
10. 配培养液
(1)取5ml枪,调节示数3.5,安上5ml枪头,置于左手边备用
(2)取1ml枪,安上1ml枪头,置于左手边备用,1ml枪用于取血清
(3)打开待传代的培养瓶盖
(4)取血清,撕下封口膜,开盖,盖过火后置于高处,用1ml枪取1ml血清(如枪头伸不进去就行5ml枪头),加入到各个待传代的培养瓶(皿)中,弃掉枪头,枪放回枪架上
(5)将血清盖和口过火后盖好,放回原处
(6)取培养基瓶,撕封口膜,过火开盖
(7)取5ml枪,用5ml枪取培养基,在每个待传代的培养瓶中加入7ml培养基(取两次3.5ml)
(8)将5ml枪,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用(保留枪头)
(9)培养瓶口与盖过火后盖好
(10)培养基瓶口和盖过火后盖好,放回原处
(11)轻轻摇晃培养瓶(皿),使培养液没过瓶(皿)底
11. 弃上清
(1)5min后,取离心后的离心管,酒精擦拭双手与离心管,将有细胞的离心管带入超净台
(2)撕下封口膜,管口过火开盖
(3)弃掉上清,置于右手边离心管架中备用
12. 重悬
(1)将堆叠的培养瓶的瓶盖拧开,盖置于火焰正前方
(2)取培养基瓶,瓶口过火开盖
(2)取5ml枪(带取过培养基的枪头)取2x(x=待传代的培养瓶个数)的培养基,加入到装有细胞的15ml离心管中
(3)手持离心管和5ml枪,轻轻吹打60次
13. 转移至培养瓶
(1)将混匀的细胞转移至装有血清和培养基的培养瓶中,每个培养瓶中加入2ml细胞悬液(此时培养瓶中应该含有9ml培养基和1ml)
(2)弃掉装有细胞的离心管,弃掉枪头,将5ml枪,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用
(3)培养瓶口和盖过后盖上(培养皿的话,皿盖过火)
(4)培养瓶(皿)走8字混匀20次
14.培养
(1)将培养瓶(皿)拿出超净台
(2)酒精灯擦拭外壁
(3)打开孵箱,放入37℃,5%CO2 培养24h
15. 收拾超净台
(1)酒精擦拭双手,进入超净台
(2)如果超净台没有封口膜了,此时可用酒精擦拭适量封口膜,放入超净台
(3)将胰酶、PBS、血清、培养基瓶的瓶口过火后用封口膜封口
(4)将移液枪恢复到最大量程,放回枪架
(5)将枪头盒以及铝制饭盒摆好位置
(6)将胰酶、PBS、血清、培养基以及废液缸拿出超净台
(7)用酒精棉球擦拭台面,盖上酒精灯
(8)关上超净台,关灯

就学了一个基本的养细胞的操作,写了19页,9468个字,当时写的不一定完全正确,大家可以挑毛病,欢迎一起讨论。

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