细胞划痕实验

它是检测细胞运动中一种成本极低又简单易行的体外试验方法。

原理：当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像，通过比较图像以确定细胞迁移速率。

实验步骤：

1.划线：先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线

2.铺板：处于对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，接种于6孔培养板；细胞铺板6×105个细胞/孔，确保第二天细胞能够长满，每孔最终的培养基总量2mL；

3.细胞培养37℃、5％CO2培养箱中培养24h

4.划痕：第二天用*头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，*头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只*头)

5.清洗：PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基

6.拍照：4倍镜下进行拍照，保证划痕居中且垂直，注意背景一致，可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定

但是！

在此之前有个非常重要的步骤，选择细胞一定要注意：

1.避免选择生长特别缓慢的细胞（例：内皮细胞）

（内皮细胞）

2.避免选择贴壁不牢的细胞（例：神经母细胞瘤）

(神经母细胞瘤)

3.避免选择堆积生长或长不满的细胞（例：巨噬细胞）

(巨噬细胞）

实验过程中出现的一些常见问题及解决方案：

问题 1 ：细胞划痕时发现细胞没有长满，或是长的太满？

解决 1 ：铺板时的数量须根据细胞的形态、增殖速度、大小进行调节，细胞较小或增殖速度慢，铺板数量需多于6 ×105个细胞/孔；细胞较大或增殖速度较快则需少于6 ×105 个细胞/ 孔；

问题2 ：细胞铺板时， 前面铺的孔细胞密度稀， 后面铺的孔细胞密度密？

解决2 ：细胞铺板， 细胞单细胞悬液混合后， 铺板过程中需要边

铺板边晃动管子， 保证细胞在悬液中均匀分布；

问题3 ：拍出来的照片背景颜色不一或亮度不一？

解决3 ：在拍照前进行白平衡；固定曝光时间。