我打算开展细胞干扰试验,因为我做用的细胞为鸭的原代成肌细胞,转染方式为脂质体转染。所以不知道该选择哪一种干扰方式合适?目前已了解到,shRNA相对较难转染入至原代细胞中,但也不知道siRNA是否相对较为容易转入细胞中。病毒干扰载体是不考虑的,太贵了。恳请各位大侠指导下小弟。
siRNA 是合成的,从公司买回来,可以直接用于短暂性的转染,用完就没有了。优点是快速便利。
shRNA 是基于质粒的。需要自己克隆,也有公司卖不过较自己克隆要贵得多。
因为是质粒,所以可以无限制的扩增,不会有用完的一天。
质粒的转染效率跟siRNA类似,不过shRNA被表达出来需要时间,所以效果可能没有siRNA直接快速。
但是shRNA质粒一般含有抗生素选择基因,这就允许你筛选稳定细胞系,不过这个很花时间(1-3个月)
不过一旦稳定细胞系筛选成功,你就再不用做转染实验了,一劳永逸。
所以两者各有所长,要看你的实验性质。
如果只是补个数据,果断用siRNA。如果建立起稳定细胞体系以后还有很多实验,建议用shRNA,
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