具中科博生研究表明，为了分离目的细胞,首先必须将目的细胞所在的动物组织材料制备成单细胞悬液。
细胞分散一方面是细胞分离纯化的前提;另一方面,在分散细胞的过别中,通过一定的辅助性方法,也能对组织细胞起到一定的分离纯化作用。例们研究发现,中枢神经系统（central nervous system)的干细胞存在于3个部位|亚脑室区、侧脑室和嗅球之间的连接部位及海马,因此取得这3个部位的组织部相当于在组织水平对神经干细胞进行了初步富集。中科博生。
机械分离与酶学解离是将组织分散成单细胞最常用的方法。在机械分离的方法中,常用的技术包括用吸管或针头吹打、用组织研磨器或注射器研磨、用不锈钢或尼龙筛网搓洗等。其中按照组织内不同细胞的大小差异,以一定孔径的不锈钢或尼龙筛网过滤细胞起到了对细胞进行初步分离纯化的作用。在酶学解离的方法中,常用的技术包括用胰蛋白酶消化、用鳌合剂处理、用不含Ca、Mg 的缓冲液浸泡（以使细胞间质内的Ca²一、Mg²游离)等。用酶学方法达到部分分|离纯化的主要依据是不同组织的细胞和间质的构成不同。例如,欲从皮肤材料获取上皮细胞,就可以利用皮肤的表皮与表皮下的结缔组织二者之间细胞间质成分的差异,以胰蛋白酶进行消化,这样,就会得到大量分散的上皮细胞,而混杂的结缔组织细胞成分很少;若用胶原酶来消化,则得到的细胞悬液中主要为成纤维细胞。中科博生。
1.利用细胞体积和密度进行分离纯化的方法
利用细胞体积和密度进行分离纯化的技术均基于沉降作用（Thomas et al.1999)。其基本原理是,在离心力作用下,细胞在一定介质中的沉降速率与细胞|的体积及细胞密度和其周围介质的密度之差成正比。细胞的体积越大,其与分离|介质的密度差越大,则细胞的沉降速率就越快。对于特定的待分离细胞来说,其体积和密度是固定的,可供选择的只是具有一定密度与黏度的分离介质。使之沉降的细胞的密度应该比介质大,而使之漂浮的细胞的密度则应比介质小。因此,实施沉降技术分离细胞的关键在于选择密度梯度形成介质,故沉降技术也称为密度梯度离心技术。中科博生。
逆流淘析(counterflow elutriation)分离技术是通过含细胞介质溶液的流力和浮力与细胞所受离心力之间相互作用而分离细胞的一种技术。细胞置于一个特殊的离心室中。离心室呈锥体形状,其顶点指向沉降方向,细胞悬浮于以向心方向连续流动的介质溶液中,同时受到离心力的作用。当向外的离心力与内向的流|力及浮力达到平衡时,每个细胞将按照它的沉降速度到达其平衡位置。通过这一 技术可进一步分离开淋巴细胞和单核细胞。CFC(在小鼠是CFU-S)主要和单核细胞一起洗脱,而体积小一些的更原始的干/祖细胞（CRU)则主要是在淋巴细胞部分。中科博生。
2.选择性的细胞凝集/形成玫瑰花结
羟乙基淀粉和甲基纤维素可以使红细胞形成大的"钱串",加速其沉降,从而比其他细胞更快地从造血细胞悬液中沉降出去。这一方法通常用于快速去除大量成熟的红细胞,而不会对有核细胞群造成太大的损失。但是,与上面提到的密度梯度离心和逆流淘析步骤一样,这一方法并没有使干细胞群相对有核细胞发生太多的富集。血液或骨髓中的T细胞可以通过与绵羊红细胞发生凝集而除去,凝集的形成是由T细胞表面的 CD2分子和绵羊红细胞上特异的配体相互作用的结果。造血细胞首先和绵羊红细胞混合,然后形成玫瑰花结的细胞与没有形成玫瑰花结的细胞通过密度梯度离心即可分开。如果样品中含有大量的T细胞（如外周血单个核细胞）,通过这种方法可使干细胞相对其他单个核细胞富集3～6倍。中科博生。
3.基于不同黏附特性的细胞分离方法
黏附于某些固相物质如玻璃或塑料的表面,是某些类型细胞的基本生物学特性之一,但另一些细胞却缺乏这种能力;或某些细胞的黏附能力强、黏附作用快,而另一些细胞黏附能力弱或黏附作用慢。根据这些差异,可以分离或消除某 些类型的细胞。这种将黏附较快的细胞与黏附较慢（或无黏附能力)的细胞分开并分别收集的处理过程就称为差速黏附处理。差速黏附处理常用于分离细胞悬液中的成纤维细胞与其他组织细胞。另外,葡聚糖凝胶G-10也可用来分离细胞。其原理同样是利用细胞的黏附特性,使之黏附于葡聚糖凝胶从而将异质性细胞悬液中具黏附能力的细胞去除。中科博生。
4.利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法
单充降抗体的特异性和多样性使利用不同抗体的合理组合分离不同类型的细胞成为可能。目前,抗体介导的细胞分离技术主要有:抗体/补体介导细胞溶瘤法、流式细胞仪细胞分选法、平面黏附分离法、免疫磁珠分离法等。从抗体介号技术获得细胞的角度看,又可分为阳性细胞选择法和阴性细胞选择法。拟从混众细胞群体中获得表达与抗体相应膜抗原的细胞群,称为阳性细胞选择法;反之拟除去表达与抗体相应膜抗原的细胞,而收集其余的细胞群体,称为阴性细胞深择法。其中上述抗体/补体介导细胞溶解法为阴性细胞选择法,而其余3种方法既可以作为阳性选择技术,也可以作为阴性选择技术。中科博生。
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