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两种病毒保存液的比较:灭活与非灭活


简介:

病毒保存液适用于新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作,是采样管内浸末采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体,可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。通常分为两种,一种是非灭活型,能够保护病毒的蛋白和核酸,另一种是灭活型,通常含有灭活病毒的裂解盐,裂解蛋白而保护核酸,两者有着各自不同的特点,有着不同的应用方向。

一、灭活型病毒保存液

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA) 两类,是生命的最基本物质之一。病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测除了病毒。病毒属于寄生生物,采样后体外无法存活,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性,就需要加入裂解盐来灭活病毒,释放出可以被检测的核酸即可。

灭活型病毒保存液主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液,里面添加有高浓度的裂解盐,能够迅速高效地使待测样本利的病毒蛋白裂解失活,可以有效防止操作员二次感染,同时又含有Rnase酶抑制剂,能保护病毒核酸不被降解,里面含有的Tris、裂解盐、EDTA等主要目的是裂解核酸而释放出核酸,从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以此判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。灭活型保存液能在常温下保存相对较长的时间,节省了病毒样品保存以及运输的成本。

灭活型病毒保存液产品的特点:

1. 操作使用简单,无需配液,体系内含有高效病毒裂解液,采样后即刻灭活病毒,有效防止二次感染风险,保障运输及检测人员安全;

2. 病毒DNA/RNA可在常温保存与运输1周不降解,按大多数商业化试剂盒进行提取后,获得的DNA/RNA质量好,得率高,可完成各种基因检测及分析实验,如PCRqPCR等,同时节省运输成本;

3.内含核酸RNA酶抑制剂,最大化程度保护病毒核酸稳定不被降解,大幅提高核酸提取效率。

4.适用于新冠病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作,可采集咽拭子鼻试子或特定部位组织样本,储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床试验。

二、非灭活型病毒保存液

非灭活型病毒保存液,不含裂解盐,但是保存的病毒完整性更好,检出率更高,主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液型保存液,除了核酸检测外还可以用于其他研究。这一种是同时保留了病毒的蛋白质外壳以及病毒核酸DNA或者RNA,这样病毒在体外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性,当然操作失误时也有一定的感染性风险。其成分通常含有Hanks液基础,庆大霉素,真菌抗生素,BSA (V) ,冷冻保护剂、生物缓冲剂及氨基酸等,保护病毒蛋白质外壳不易分解,最大程度地保持了病毒样本的原始性,采样后长时间保存需要保持严格低温。

非灭活型病毒保存液特点:

1. 低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。

2. 适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子等

3. 可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。

4. 可以用柱式病毒DNAout或柱式病毒RNAout提取病毒核酸。

5. 采样液中的抗生素能有效防止细菌和真菌污染。

6. 采样液添加了牛血清白蛋白,能保护病毒样本,提高分离率。

从两者比较可以看出,非灭活型设计的目的就是为了保留病毒蛋白完整性,其成分比灭活型的更复杂,成本也要稍高一些。至于增加了感染风险方面其实并不用担心,能做病毒核酸检测的机构只要是正规的按要求操作是没有危险的,而且也没出现过检测人员因病毒保存液问题造成病毒感染的案例。

非灭活型病毒保存液对实验要求要更高一些,同时其灵敏度也要高一些,应用也更多,毕竟保存液加在病毒拭子采样管里是为了病毒检测服务的,不能因其感染性就否定它,真正控制风险应该在于采样和检测操作上。

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