白癜风样小鼠皮肤脱色模型研究进展与思考[12]

二、本课题组关于白癜风小鼠模型的探索目前本课题组多采用陈婷团队的黑素瘤⁃Treg方案诱导构建白癜风模型。但在该模型构建中我们发现，其对B16F10细胞及CD4+ T细胞耗竭抗体的活性状态要求很高，同时操作者要经过严格的培训才能掌握该技术；此外，该模型使用的是普通C57BL/6 小鼠，其毛发变白并不适合白癜风的研究，而以鼠尾白斑进行实验观察时又存在样品有限、干预方式困难等局限性。因此，为了构建更优的白癜风小鼠模型，本课题组目前正在建立并优化以下两种模型。第一，过继转移Pmel⁃1细胞的SCF小鼠模型，即通过SCF转基因小鼠眶后注射的方式过继转移Pmel⁃1 细胞，并使用 rVV⁃hgp100重组病毒激活转移的CD8+ T细胞而诱发产生白斑［38］。该模型稳定性好，与人白癜风发病特点类似。在模型制备中，我们发现：①要严格把控辐照剂量，在Harris课题组采用γ射线总剂量5 Gy辐照1次基础上，通过调整适宜辐照剂量、延长辐照时间、降低辐照率，探索出符合国内使用要求及实验室特点的辐照方案；②因辐照一定程度上破坏了小鼠的免疫系统，   在实验及转运过程中应尽可能避免不必要的暴露和污染，以免对实验结果产生影响，甚至引起实验动物的死亡；③该造模方法使用的是表皮及毛囊均有黑素细胞的SCF小鼠，尾部呈黑色，尾静脉显示不清，因此常使用眶后注射来过继转移CD8+ T细胞，操作过程中易出现CD8+ T细胞状态差、过继转移量不足、小鼠损伤、重组病毒活性降低等问题，要求操作者在操作过程中要迅速而准确，这些均是制约造模成功与否的关键。第二，莫诺苯宗诱导SCF 鼠白癜风样模型。我们在 SCF 转基因鼠背部涂抹 40%莫诺苯宗，10 d 后于涂抹部位观察到白斑，随着涂抹时间的延长，白斑进一步加重，取皮损周围皮肤进行Melan⁃A染色，可见黑素细胞明显减少。在该模型的制备中，我们发现：①制备前期脱色不稳定，需要连续涂抹莫诺苯宗，否则很容易发生复色；②该模型诱发脱色快，方法简单，适用于疾病治疗的研究。