作者:解螺旋·子非鱼
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细胞转染对初接触细胞实验的菜鸟而言,是一道难过的坎儿。当科研汪们在这个坎儿上摔了无数次的跟头后,心里的阴影面积便被无限扩大,似乎只要碰到细胞转染就永无翻身之日。然而现在就放弃该实验还为之过早。正所谓授之以鱼不如授之以渔,同时也为了让大家成功跨过这道坎儿,小鱼这就把做细胞转染的技巧分享给大家,让你分分钟从菜鸟变成细胞转染达人!
细胞转染是指将DNA或RNA导入真核细胞中,用于研究基因功能和蛋白表达分析等,可依据是否整合到细胞基因组,分为瞬时转染(24-96h)和稳定转染。
细胞转染方法类型及不同之处如下面两张图片所示,大家可以依据自己的实验需求来选择不同的实验方法。
其中,实验中应用最广泛的是脂质体介导的细胞转染。
细胞转染具体实验步骤的视频:
一般影响转染效率的主要因素:细胞、血清、抗生素、核酸质量与数量、转染技术。只要在这几个因素上多加注意,就可以避免掉进细胞转染效率低下的大坑。
3. 挑出单克隆后就可以用维持浓度,一般是筛选浓度的1/2。在维持抗性筛选过程中,每3~5天都要更换一次含有抗生素的筛选液。
1.许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。转染时各种培养皿添加质粒和脂质体参考量见下表:
3. 用脂质体转染时,要小心轻柔的将脂质体加入到培养基中并轻轻混匀,避免粗暴吹打使脂质体失效。
4在此小鱼向大家推荐两款高性能转染试剂: X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP。它们能够提供高的转染效率、重复性和细胞存活率。
X-tremeGENE 9试剂是一类非脂质体型多组份试剂,具有极低的细胞毒性、操作简便、在含血清条件下对各类常用细胞系仍均具有较高的转染效率等诸多优点,它非常适合开展各类细胞分析应用。
X-tremeGENE HP试剂是一种无动物源成分的非脂质体转染试剂,可成功转染多种真核细胞,包括昆虫细胞和难转染细胞系(如Sf9、U-2 OS、MEF、MCF7、Hep G2、PC-3、HeLa、HT-29、HT-1080、K-562、RAW 264.7、Jurkat、PC-12和HCT 116)。
4. 电转时,不同的细胞需要的电压是不一样的,需要做预实验,摸索最佳条件。对于大多数细胞而言,最佳电压位于250-1250v/cm。电击后,应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10min,使细胞恢复损伤。
细胞电转的实验步骤的视频:
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