作者：子非鱼（转载请注：解螺旋·医生科研助手）
众所周知，低分文章要想逆袭，实现向高分文章的跳跃，就一定少不了要将细胞豪门中分子间错综复杂的关系屡屡清楚。为了找寻能让自家目的蛋白荣登科研“头条榜”的“花边新闻”，一众科研者可谓是操碎了心。庆幸的是，酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid，Y2H）和酵母单杂交（Yeast One-Hybrid，Y1H）实验让蛋白质与其好基友（蛋白质、DNA、RNA）的关系在科研者面前变得无所遁形。
蛋白钓鱼术——酵母双杂交
（Yeast Two-Hybrid，Y2H）
通常一个蛋白在本性上可以同时喜欢很多其他的蛋白，但最终还是会有个最喜欢的，而在Y2H中就能发现他的喜好。换言之，Y2H就是研究一群男女间的自由恋爱问题，而它为两个蛋白牵线拉桥的方法，简单概括起来就一句话：广撒网，钓大鱼。
首先，把目的基因构建成DNA结合质粒（BD质粒）转入a型酵母中形成钓饵（Bait）；其次将全cDNA片段构建的转录激活质粒（AD质粒）转化到b型酵母中，每个b型酵母含有一个随机的AD质粒，就形成了酵母库；最后利用酵母接合生殖的特征使得AD和BD两个质粒同时进入到一个酵母中，当目的蛋白和酵母库中AD质粒所表达的蛋白相“合拍”时，质粒上的氨基酸合成基因就会被启动激活，使得酵母可以在营养缺陷型的培养基上生长了，这样就弄清楚谁才是目的蛋白的“命中真爱”了。
然而在Y2H中，由于酵母库的构建是通过cDNA片段链接到质粒上的，经常会产生2/3移码突变的假阳性。因而，在研究蛋白质互作过程中，在用Y2H来筛选出相关蛋白后，还需用Co-IP和GST pulldown进行验证，看看目的蛋白对“真爱”是否做到了“没有你不行”又或者可能“脚踏两只船”还拥有其他的新伙伴。总之，只有依靠缜密的阴性、阳性对照才能真正在蛋白实验中披沙拣金、去伪存真。
DNA识别者——酵母单杂交
（Yeast One-Hybrid，Y1H）
而一提及蛋白质与DNA之间千丝万缕的关系，各位小伙伴立刻会向ChIP-qPCR，ChIP-RNAseq或荧光素酶报告实验等“神助攻”来寻求帮助。
可是你造么？通过酵母单杂交（Y1H），可快速鉴定与感兴趣的特定调节DNA序列（bait序列）相互作用的蛋白质，除了“明星蛋白”异源转录因子，还可找到一些其他“幕后英雄”，如DNA复制蛋白、修复蛋白及抑制蛋白。更重要的是，Y1H还有着一项得天独厚的优势：可检测蛋白异构体（isoform）与DNA特异性相互作用，而这正是依赖于敏感和特异性抗体绑定到特定靶蛋白的ChIP很难做到的。
举个栗子，当通过各类芯片筛选出了一个在肿瘤组织中异常高表达的差异基因A，可通过Y1H实验为其组织一场相亲大会：即将构建含有报告基因（基因A作为Bait序列）的酵母单细胞株，与后续导入该菌株的表达特定蛋白的表达质粒库“见面”，如果某蛋白能与上游的Bait序列“情投意合”，可使融合激活结构域（AD）与报告基因的启动子元件紧密接近，从而激活报告基因的下游转录，使得酵母可以在营养缺陷型的培养基上生长。接下来就可对该蛋白调控基因A的机制进行深入研究。
然而，任何筛选都存在假阳性，Y1H也不例外；且Y1H不提供关于DNA-蛋白质相互作用的功能性后果的任何信息。可见在生物实验中，单一的证据都是薄弱的，无论它貌似多么正确，也要通过对照和多方取证才能确定真正的事实。
升级版——酵母三交技术
（Yeast Three-hybrid，Y3H）
目前，从基本科学和临床角度上，通过Y3H来理解与RNA病毒相关的疾病过程是很重要的。而在具体的实践过程中，Y3H可以用于筛选RNA文库以及cDNA文库。由于Y3H在现阶段还是一种新技术，所以迄今为止对其的相关报道还是比较少的。
参考文献：
1）An Overview of Yeast Two-Hybrid (Y2H) Screening
2）An overview of the Yeast one-hybrid assay
3）Two Hybrid Services
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