ImageJ的功能很多（这是为什么我们一直在做ImageJ教程的一个原因），而且基本都是自动操作。今天我们就来看看ImageJ是如何来计算实验照片中颗粒的粒径，尤其是圆形纳米颗粒的。
ImageJ软件是美国NIH开发的一款在生物医学中应用十分广泛的免费软件，下载地址为https://imagej.nih.gov/ij/ 。今天给大家分享使用ImageJ分析细胞或者粒子粒径及其粒径分布图。
如何分析细胞粒径？
1. File ->Open，打开待分析示例图片（DAPI染核）：
2. 设置标尺，可得到实际粒径而不是像素。
校正标尺：点击Straight工具
Analyze ->Set Scale，在已知距离中填入10 μm，选择Global则校正标尺对本次打开所有图片均有效。
3. 转化为8-bit灰度图片：Image ->Type ->8-bit。
选中待分析粒子：
Image -> Adjust -> Threshold 调节阈值，选择所有阳性信号（红色代表选中，背景为黑色勾选Dark background）：
在ImageJ软件Analyze下选择Set Measurements设置测量参数，
选择Feret’s diameter与Limit to threshold只计算红色选择的面积），点击OK。
Feret’s diameter直径为某一形状边界任意两点之间的的最长距离，也称为最大距离。
4. 在ImageJ软件Analyze下选择Analyze Particles，选择Display results和Add to Manager：
点击OK，得到结果：
5. 下载ROI Color Coder插件，下载地址：
https://github.com/tferr/Scripts/blob/master/BAR/src/main/resources/scripts/BAR/Annotation/README.md#roi-color-coder
ROI Color Coder插件通过将测量值与查找LUT匹配来生成粒度大小的热图，从而对ROI Manager选择进行着色：
官网ROI Color Coder插件界面如下：
对于本粒子，点击Plugins，选择ROI Color Coder：
Measurement选择Feret，点击OK，其他设置可见上图详细说明。可得到根据粒径大小生成的热图，即不同粒径对应不同颜色：
如何得到粒径分布图？
1. Distribution Plotter插件下载地址：https://imagej.net/BAR 。
2. 点击Plugins，Distribution Plotter，选择绘制Parameter为Feret直径：
3. 得到粒径分布图，从图中可知共有24个粒子（N=24），粒径最大值为148.56（Max：148.56），均值Mean：56.28，中位数Median为63.54，最小值Min：2.24，标准差SD为41.32，组间距为45.75，分为4组。粒径0-50之间的有9个，50-100之间的粒子有12个。
此外也可以使用Origin软件进行绘制，File ->Save as保存为Excel文件：
打开Excel文件，将Feret列数据拷贝到Origin中：
选中该列然后点击菜单栏中Statistic-->Descriptive Statistic-->Frequency count：
可得到粒径的频数分布情况：
绘制粒径分布图，美化即可：
总结
测量粒径以及粒径分布遵循以下原则，即先选中、后测量。能够准确选中后，选择需要测量的参数即可，之后将得到的参数绘制分布图及其他操作。
今天的ImageJ分析粒径给大家分享到这里，希望对大家有所帮助！
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