癌症免疫疗法可以重振被抑制的免疫系统，从而诱导针对恶性细胞的抗肿瘤免疫反应。免疫检查点抑制剂（ICIs），如抗PD1和抗CTLA4抗体，是最成功的免疫治疗方法之一，已在从黑色素瘤到肺癌的各种癌症中显示出治疗效果。然而，只有少数癌症患者对ICIs治疗有反应，这取决于他们的免疫表型和癌症基因型。许多患者对这种联合疗法的反应仍然很差，纳米疗法可能是改善化学免疫疗法的一种新策略。
血红素加氧酶-1（HO1）是一种应激诱导、细胞保护和抗氧化酶，它催化血红素降解为一氧化碳（CO）、胆绿素和铁。HO1产生的CO是一种主要的免疫调节、免疫抑制介质。此前有报道称，HO1具有致瘤特性，因为其诱导导致多种人类和小鼠癌细胞系产生化疗耐药性。此外，最近的研究表明HO1部分介导M1/M2巨噬细胞极化，HO1的髓系特异性敲除通过肿瘤髓系重编程和细胞毒性T细胞激活诱导抗肿瘤免疫。
为了验证iLNTB的化学促进作用，用iLNTB治疗小鼠黑色素瘤和小鼠乳腺癌细胞，Cy5标记的iLNTB显示，在iLNTB培养30分钟后，两种类型的细胞都能快速摄取。iLNTB主要分布在胞浆和核周区。接下来，B16F10和E0771细胞在“标准治疗”化疗方案阿霉素（Dox）的存在下用iLNC和iLNTB治疗。与未处理和iLNC处理的细胞相比，iLNTB处理显著降低HO1 mRNA水平，并抑制Dox反应性HO1上调。与对照组相比，仅Dox治疗可诱导表面钙网蛋白（CRT）水平，并增加ATP、HMGB1的细胞外释放，这表明免疫原性细胞死亡，而iLNC联合Dox治疗与仅Dox组的效果相当。与仅Dox和iLNC+Dox组相比，iLNTB联合Dox治疗增加了B16F10、E0771细胞的所有DAMP。总的来说，这些结果证明了iLNTB对癌细胞的化学促进作用，从而增加了Dox诱导的免疫原性癌细胞死亡。
程序性死亡配体1（PD-L1）的表达不仅在癌细胞上有报道，而且在肿瘤微环境中的髓样细胞上也有报道。因此，一种抗PD-L1抗体被用于癌症和肿瘤髓系双细胞靶向传递iLNTB。首先，在体内B16F10荷瘤模型中分析肿瘤细胞上PD-L1的表达，根据CD11b、Ly6C、Ly6G和F4/80的表达对肿瘤髓样细胞进行门控，通过CD3、CD8和CD4的表达对T细胞进行门控。接下来，在注射后2小时，通过流式细胞术分析肿瘤髓系和癌细胞靶向摄取的T-iLNTB。抗PD-L1修饰的iLNTB分别被7.2%、33.3%、39.7%和32.1%的癌细胞、TAMo、TAM和TAN吸收，表明靶向给药的癌细胞摄取量增加，而肿瘤骨髓细胞摄取量增加1.58至1.78倍。在细胞摄取研究的高度偏差上，肿瘤微环境结构的异质性和可变性导致细胞摄取水平的偏差高于肿瘤组织积累水平的偏差。此外，肿瘤的可变细胞密度可能导致细胞摄取的高度偏差。总之，与I-iLNTB相比，PD-L1 Ab修饰的iLNTB（T-iLNTB）增加了肿瘤髓系细胞和癌细胞对iLNTB的靶向递送和细胞摄取。
在黑色素瘤的晚期，由于癌细胞转移到其他器官，患者的死亡率急剧上升。包括TAM在内的肿瘤髓样细胞通过加速癌细胞外渗和转移前生态位形成而具有促转移作用。为了测试iLNTB和联合治疗的抗转移效果，通过尾静脉向小鼠注射B16F10细胞以建立转移性疾病，并用iLNTB和Dox治疗。与PBS、Dox、T-iLNC+Dox、T-iLNTB、I-iLNTB+Dox组分别为14.1、20.3、8.8、10.1、6.1相比，T-iLNTB与Dox联合治疗显著减少了肺转移结节的数量，平均计数为2。值得注意的是，与注射PBS的小鼠相比，Dox治疗的小鼠表现出更高数量的转移性结节，这一现象可以用之前关于化疗诱导的癌症转移的报告来解释。总体而言，在黑色素瘤模型中，T-iLNTB与Dox的联合治疗被发现具有有效的抗转移效果，这将对晚期黑色素瘤患者的治疗产生疗效。
总之，PD-L1抗体的双重肿瘤和骨髓细胞靶向增加了iLNTB的肿瘤定位和纳米治疗效果。iLNTB介导的HO1抑制增强了对化疗药物的敏感性，癌细胞中的Dox增加了Dox诱导的免疫原性细胞死亡，以及具有更高单核细胞和中性粒细胞比率和减少巨噬细胞聚集的重编程肿瘤髓样细胞。T-iLNTB介导的肿瘤髓系重编程和免疫原性细胞死亡增加，从而诱导肿瘤微环境中CD8+细胞毒性T细胞的浸润。此外，iLNTB在晚期黑色素瘤模型中显示出抗转移作用，可能是黑色素瘤患者的一种有前途的治疗策略。总的来说，双靶向T-iLNTB是一种新的、最佳的、实用的治疗方式，可以促进目前化学免疫疗法的使用。
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