食用菌2

​第二讲

母种的分离与选育

食用菌种的分离与选育，是一项比较难以掌握的技术，解放前我们所栽培的蘑菇菌种，必须从国外运进。而且价格昂贵，很多人根本无从知晓它的技术，这足以说明其难处。自从解放以后，我国的科技工作者急起直追，现在对于食用菌的制种技术已经有所普及提高。实践证明，只要经过不懈的努力学习，一般的农户也完全可以掌握与开展对于食用菌的分离与制种试验工作。

菌种--母种，是食用菌的根本，要获得优质高产的效果，必须要有优良的菌种，菌种性状的优劣，将直接影响到产量的丰歉。

那么，什么叫做母种?一学初学者听起来比较陌生，母种，便是食用菌从孢子或子实体组织，在无菌操作条件下，分离其中的一少粒孢子或子实体组织，接种在培养基上，萌发、挑选、培养而制成的,还有的人称此为第一级试管母种。

一级试管菌种刚获得时数量很少，必须进一步扩大培养由母种再次扩大培养的菌种称作二级菌种，即俗叫做原种，经扩大培养的原种数量还不多，还进行再次扩大培养，由原种扩大培养的菌种称作三级菌种，也就是直接用在大床栽培或段木栽培的生产种。

由于分离栽培食用菌的母种、原种，必须要有丰富的经验和比较好的设备条件。故对于初学者，和设备比较差的单位在进行试验或进行大规模生产菌种时，必须先由专门从事食用菌研究的科研单位提供。以防止招至试验或生产的损失，为了满足学员的需要，我厂可提供优良的母种、原种以供作试验之用。

什么叫做培养基?培养基是指我们分离或扩大培养食用菌时，用来供孢子或菌丝体荫发生长的营养物质，这些营养物质由专门的配方配制而成，培养基一般用试管、三角烧瓶或广口菌种瓶装，

一、培养基的配方与制作

可以用来培养食用菌的配方有多种多样。这里仅举二例说明:(此两种配方广泛用于微生物菌类培养)

1.马铃薯琼脂培养基配方:

马铃薯200克 葡萄糖20克 水1000毫升 琼脂20克

2.马铃薯综合培养基配方:

马铃薯200克 葡萄糖20克 琼脂20克

磷酸二氢钾3克 硫酸镁1.5克 维生素B110毫克

琼脂是什么东西?琼脂是一种生物凝固剂，是由海生植物石菜花提炼而制成。(一般在化工商店有售)每包15元它的化学本质是多糖,呈弱酸反应,一般浓度的熔点为90°C,凝固点为40°C。其主要成份为:水16%，灰分4.4%，氧化钙115%:氧化镁0.77%,氮0.4%。因为琼脂的凝固点高。含氮量低，只有极个别微生物能够分解琼脂,因此,琼脂本身不是一种营养物质，由于它凝固后，可以再加热熔化，在所制固体斜面培养基时，用它作为凝固剂是十分理想的。

以上两个配方基本上均适合绝大多数食用菌的分离与培养。

培养基的具体制法:

先将马铃薯洗净去皮，切成薄片，按比例称取200克,加水煮沸20分钟，捞起去渣，用两层纱布过滤取其纯汁，后加入20克琼脂、糖、及其它微量元素，用文火慢慢加热，并不断搅拌，琼脂全部溶化后，用热水补足1000毫升，然后迅速趁热分装进试管内，装量占试管总长五分之一，装管时，可用大漏斗滤入，切勿使管口附近污沾，如已污沾要用毛刷洗净，装入完毕，每支试管或烧瓶均用棉花塞紧。

当你把棉花塞塞好之后，可将试管分别用牛皮纸包捆，然后垂直装入高压锅内，进行灭菌。(如图3)农户小量试验不必买大型的高压锅，一般市场上出售用作煮饭的小型高压锅(26公分每个80元)便可，开火后，在1.1公斤/1平方厘米压力下，维持30分钟，即可达到彻底灭菌的目的。“灭菌”指即经过加热后，培养基里面的杂菌全部杀死，变成空白无菌的试管培养基，待分离接种之用

经灭菌后的培养基试管，要趁热斜放摆成斜面，待其冷却凝固之后，即可放入接种箱内备用。

二、食用菌的孢子分离方法(如图四)

我们培养食用菌，好比农民种小麦一样，必须首先有它的种子，食用菌的“种子”并不是象小麦一样收割即得，它细小如尘埃，而且还与其它杂菌混杂在一起，要分离挑选单个纯孢子菌种，那可不是一件轻易的事，弄不好培养基表面上五颜六色，使你无法分别出来。当然，这也是一项有趣的实验过程，当你经过多次试验，终于获得成功之后，你那高兴的心情是无法理解的。

现将其分离方法分述如下:

种菇的选择，用来分离孢子菇体，叫做“种菇”。种菇的选择必须过细进行，种菇的本身必须具备有优良的品系，

在优中选优。例如:我们选谷种,要先从优良的品系田块中选种，然后，在优良品系田块里挑选大粒饱满的种穗。食用菌的选种也是这样，另外，种菇还可以从野生的木耳、香菇等菇类中采集挑选分离，优良的种菇必须具备以下几个殊点:(一)菇(耳)特别大朵，菇柄、菇盖粗壮肥大，在正常环境条件下，菌丝淡白，生长力强，健壮有力，并且具有浓厚的菇类香味。(二)菌丝具有良好的遗传性，出菇整齐迅速，抵抗恶劣环境与病虫害的能力强。(三)经过少量培养试验与大面积培养均获得比较高的产量，经济效益很高。

选择一个好的种菇，必须从菌丝生长开始，进行淘汰选择，当子实体形成之后，更应细心观察，确定挑选的单个种菇后，待它长到八分成熟，而菌盖将开尚未开展时为适宜，摘下的种菇，先用无菌刀切掉带泥部分，(基部)然后用无菌水多次冲洗,再用无菌干净的纸包好,带回试验室进行分离试验。

分离食用菌有几种方法:即孢子分离、组织分离、寄主分离，这里仅说明前两项。

孢子分离:种菇经过严格的消毒清洗后，迅速放入经过消毒的无菌接种箱内，然后再次用75%酒精或0.1~0.2%的升汞水进行严密的表面消毒，(升汞水是一种剧毒剂，一般在医药公司或化工商店才有售)表面消毒指:即将种菇放入75%酒精或0.1~0.2%的升汞水里浸泡2~3分钟，便迅速捞起，这样既可保证菇体内的组织不死亡，又可达到杀死菇体表面所污染杂菌的目的，让菇体仍具有生命力，使其继续生长形成孢子，供我们采集选育。

种菇经过上述严密消毒处理后，即可在接种箱内插入采集器的支持架上，(如图4)支持架可用不锈钢或铜丝弯曲的器具组成。(类似点蚊香的支持架)，在支持架下，放置一培养皿，作为收集孢子用，在支持架外面，另用一个大玻璃罩罩住，所用的玻璃罩，支持架，培养皿等在使用前，均经过严密的高压消毒处理，整个过程均必须按照无菌操作要求进行，如有稍为松懈，将导至杂菌的污染，从而使分离试验受到失败。

另外，如果初学者在没有玻璃罩 与培养皿等用具的时候，可以用比较简单的方法来采集孢子，这种方法叫做悬挂法，它的用具仅是一只大的玻璃瓶或比较大的三角烧瓶代替便可，它的瓶底部装入培养基，种菇用铁丝勾住，使菌褶朝下，菌盖何上，吊挂在瓶子中央即可(瓶口塞上棉花塞)。

经上述处理后，即可将种菇采集器放入恒温室内，等待种菇释放孢子。同志们请注意:因为不同的食用菌，其释放孢子要求的温度并不相同。如:木耳菌释放孢子的适宜温度为20~26°C、香菇菌12~18°C、银耳菌20~2金°C,蘑菇菌14~18°C。如果温度过高或过低，均不利于孢子的形成与发生，我们应尽量满足它们的要求，才能获得比较理 想的 孢子。

在适宜的条件下，经培养1~2天后，孢子开始形成并象粉木状掉落在采集器培养基的表面上，用肉眼观察便可看到，这时便可以进行纯分离，提纯分离的方法一般均是采用稀释培养法，即在接种箱内，打开玻璃罩，用接种针在酒精灯火焰下烧去一次，冷却后，插入培养皿内，挑出一点孢子堆，洗入10亳升的无菌水内，充分揽拌，然后用针尖沾一点浮悬液，轻轻涂擦在培养基的表面上，(马铃薯琼脂培养基试管若干支事先消毒配制备用)数日之后，斜面培养基上开始形成星星点点的菌落。当菌落形成之后，它一出现，即可

枝直接插入土中，使其从新生根长叶的一样。前面说过，因为食用菌的子实体本身实质上全部是一堆分化了的菌丝团。任取它们其中的一点，放置在适宜的培养基上，它都具有很强的再生能力。根据这个原理，我们便可以通过组织分离的方法而获得它的纯菌种--纯的菌丝体。

组织分离是一种无性繁殖，在一块菌肉当中，它们双孢菌丝中的两个核并没有融合，即双亲的染色体并没有发生重组。因此，它们也都能生长出菇，无论是幼菇还是老熟的种菇，只要是它们的菌肉新鲜，都能分离培养菌种。

采用组织分离法，在选择种菇时，以及对于种菇的消毒处理等方法与孢子分离方法均相同，这里不再重述。

当你将种菇处理好之后，分离时，应首先将摄 子、小刀、接种针,试管斜面培养基等用具放入接种箱内消毒,接种箱的消毒方法有几种，比较简单的是:用高锰酸钾加入甲醛进行蒸发消毒。如没有这些化学药品，可以用硫磺烧熏。但是必须指出的是:种菇决不能一起放入箱内消毒。否则种菇全部烂掉死亡作废。

经去消毒的按种箱约24小时(持续时间)可随时将种菇放入箱内，具体的操作方法是:先用75%酒精将种菇擦洗数次，然后用消毒的小刀切开菌盖，并挖出菌肉内部组织块，其大小如黄豆。再用无菌的接种针轻轻挑取刚切出的菌块，迅速移接入事先准备好的马玲薯琼脂培养基试管内，并重新塞好棉花，一个种菇可分别多接若干支试管。

分离接种后的菌管，要迅速放入20~25°C培养室内，恒温培养4-5天，以后每天要定时检查观察，当你发现组织块慢慢生长出白色绒毛状菌丝团后，你会感到无比的高兴，这说明你的初次学习分离试验快成功了!

这样，大约又经过几天时间的观察，洁白的菌丝团即可长满试管。这时，你可以从数支试管中挑选生长比较旺盛的菌管作为继续扩大培养的母种。

当然，当你获得母种之后，并不能马上急于用来扩大大批的生产种，还必需经去严格的培养试验，即小区出菇培养试验，观察记录选取比较理想的菌株(试管)为你今后扩大生产之用.

菌种的保存(藏):食用菌种一经分离培养成功，可以立即用作扩大培养，如不及时使用，可放入冰箱保存，一般在4°C~8°C的条件下,可存放2个月，3个月后，从箱内取出另转试管，继续放入保存。如此往复可保持菌种不变质退化。但整个转管培养次数也不要太多，一般可连续转管(代传)4~5次，太多了也会影响菌丝的老化，失过其优良的种性。

实验二

1.请到化工商店购买琼脂、马玲薯、磷酸二氢钾等药品，以及各种试验用具(如酒精灯、试管、培养皿、吸管、摄子、无菌刀等)参阅讲义资料，自己动手做制作马玲薯培养基的实验。

2.用玻璃、木箱制作一个简易的接种箱。

3.用我厂免费赠送邮寄去的凤尾菇菌试管母种作一次转管接种培着试验，观察菌丝生长情况，检查是否受到杂菌污染。

4 .接种转管试验成功之后，将已生长的菌 种妥善保存，准备留作学习制作“原种”生产种实习之用。

5，原种，生产种制成之后作出菇试验，出菇之后再作孢子分离，组织分离实验。