SDS-PAGE各实验试剂的配制

SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。

1. 分离胶(12%)

配制所需试剂所需体积

分离胶(12％)30％丙烯酰胺6.0 ml

1.5 mol/l Tris-HCl3.8 ml

10%SDS150 μl

10%过硫酸铵150 μl

TEMED6 μl

蒸馏水4.9 ml

2. 浓缩胶(5%)

配制所需试剂所需体积

浓缩胶(5％)30％丙烯酰胺1.3 ml

1.5 mol/l Tris-HCl1.0 ml

10%SDS80 μl

10%过硫酸铵80 μl

TEMED8 μl

蒸馏水5.5 ml

3. 分离胶缓冲液(pH8.9)

配制所需试剂所需体积

分离胶缓冲液Tris36.6 g

1 mol/l HCl48 ml

蒸馏水补足至100 ml

4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)

配制所需试剂所需体积

浓缩胶缓冲液（pH6.7）Tris5.98 g

1 mol/l HCl48 ml

蒸馏水补足至100 ml

5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)

配制所需试剂所需体积

30%丙烯酰胺（pH≤7.0）丙烯酰胺29 g

甲叉-双丙烯酰胺1 g

蒸馏水补足至100 ml

6. 10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。

7. 10%SDS：将10 g SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解)，再定容至100ml，室温存放。

8. 样品缓冲液

配制所需试剂所需体积

样品缓冲液1 M Tris-HCl（pH6.7）5 ml

SDS2.5 g

巯基乙醇1 ml

溴酚兰0.05 g

蔗糖10 g

蒸馏水补足至100ml

9. 考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。

10. Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)

配制所需试剂所需体积

Tris-甘氨酸 电泳缓冲液（pH8.3）Tris碱15.1 g

甘氨酸94 g

10％（W/V）SDS50 ml

去离子水补足至100 ml

凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久，有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出现沉淀。

文章转自英格恩生物技术博客！