近年来,随着子宫内膜癌分子分型的应用和发展,对子宫内膜癌患者的诊断、治疗及预后管理产生了重要的影响。作为平替TP53基因检测的方法,P53蛋白免疫组化检测具有快速、准确、简便、经济等特点[1]。尽管经过培训后对P53的判读可以达到较好的一致性,然而在实际工作中不同病理医生之间P53的判读结果仍然存在显著差异[2]。
本文以2016/2018年加拿大卡尔加里大学Martin
Köbel等发表的两篇论文为背景介绍P53免疫组化在子宫内膜癌中的判读[2, 3]。
一
P53的免疫组化表达模式
P53蛋白的免疫组化表达模式可以分为野生型、过表达型、完全缺失型、胞浆型4种类型。其中野生型表现为肿瘤细胞强弱不等的核阳(图1A),野生型P53的表达水平依赖于细胞的分化状态,并与增殖活性有关。过表达型表现为肿瘤细胞核强阳,且占比≥80%肿瘤细胞(图1B),尽管胞浆有轻微着色,但是不应该判读为胞浆型。完全缺失型表现为肿瘤细胞核完全不着色,同时内对照(正常腺体、淋巴细胞、成纤维细胞等)表达为强弱不等阳性(图1C)。胞浆型表现为肿瘤细胞胞浆强阳,同时胞核表现为强弱不等的野生型表达模式(图1D)。
图1.P53免疫组化表达模式.野生型(A),过表达型(B),完全缺失型(C),胞浆型(D).
建议不要将P53 IHC只报告为阳性/阴性,而应报告为野生型或突变型/异常表达,同时对后者表达模式做出描述(过表达型/胞浆型/完全缺失型),如P53(突变型/异常表达,过表达型)。
二
P53判读难点——“高表达”野生型
表达模式:整体染色强,可伴有胞浆染色深,易误判为“过表达型”(图2A, B);
原因分析:肿瘤高增殖状态,总体染色较强等;
判读要点:染色模式总体表现为强弱不等,总体强阳的核染色比例应<80%;肿瘤间质细胞较强的染色模式可以作为参照;
三
P53判读难点——“低表达”野生型
表达模式:整体染色弱,易误判为“完全缺失型”(图3);
原因分析:肿瘤细胞低增殖,总体染色弱,抗体降解等;
判读要点:内对照很重要,当间质细胞染色为阴性时,不应该解读为“完全缺失型”;
图3.图为同一病例不同平台染色结果:(左)弱阳,但间质细胞无着色; (右)为强弱不等核阳的野生型。
四
P53判读难点——“低表达”过表达型
表达模式:整体染色弱,或局灶肿瘤细胞表现为强弱不等核阳,易误判为“野生型”(图4);
原因分析:抗体降解,剪切变异,整体染色弱等;
判读要点:总体强阳的核染色比例应≥80%;肿瘤间质细胞较弱的染色模式可以作为参照;
图4. 图为P53过表达型病例,局灶区域出现强弱不等核阳(右下角缩略图为其他区域的表达模式)。
五
P53判读难点——胞浆型
表达模式:肿瘤细胞胞浆呈中-强阳,伴胞核强弱不等阳。当“野生型”或“过表达型”胞浆染色较强时易与之混淆(图5,6);
原因分析:TP53基因核定位结构域损坏;
判读要点:在没有背景非特异性着色的前提下,胞浆染色强度至少为中等强度。核染色的强度可以缺失或强弱不等,但不能弥漫强阳;
图5.(C)为P53胞浆型染色模式,肿瘤细胞胞浆中-强阳,伴胞核强弱不等阳;(D)为P53野生型染色模式,伴胞浆弱阳着色,可能为显色过强所致,不应判读为胞浆型。
图6. 两例高级别浆液性癌的P53 IHC染色. (左)图上半部分肿瘤细胞胞浆强阳着色, (右)图胞浆(甚至间质)中-强阳着色,但细胞核均为弥漫强阳,此时应判读为过表达型,而不是胞浆型。
六
P53异质性表达
表达模式:肿瘤细胞P53呈现多种染色模式(图7);
原因分析:TP53基因亚克隆突变、肿瘤基因突变“二次打击”等;
判读要点:注意甄别因样本抗原保存不好(固定不好)导致的染色不均匀;这种表达模式在高级别浆液性癌中少见(<3%),而在其他肿瘤类型中较易见;
图7. P53异质性表达。(A)图示野生型(左上)伴过表达型(右下);(B)图示野生型(下),伴过表达型(右上)与完全缺失型(左下);(C)图示野生型(右)伴过表达型(左);(D)图示野生型(右),伴过表达型(中)与完全缺失型(左)。
当免疫组化P53表达模式判读困难时,建议认真检查内、外对照着色情况及质控条件,避免错误判读为突变型/异常表达模式。突变型表达模式的P53往往提示临床存在TP53致癌性突变,而P53的野生型模式存在约15%的非判读因素引起的不符合率。
目前免疫组化P53的主要应用目的在于预测有无TP53基因致癌性突变,而不是具体做出某种突变的判读。当P53免疫组化判读结果与TP53基因检测结果不一致时,在质控合格的前提下,应该以TP53基因检测结果为准。
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