转化熊胆粉中药材标准草案

海南省药品监督管理局关于转化熊胆粉中药材标准的公示

根据《海南省药材标准与饮片炮制规范审定与发布程序》，由海南海口金熊药业有限公司制定的《体外转化熊胆粉中药材标准》已完成标准复核、专家组审议、标准完善、专家审定等程序，拟发布执行。现向社会各界公示征求意见，公示期为:2022年7月28日至2022年8月13日。如有异议，可来函告知我局。

通讯地址:海南省海口市南海大道53号海南省药品监督管理局药品注册与生产监管处(1117室)，邮编:570216。

联系人:唐老师0898-66832540

电子邮箱:[e-mail]

附件:1. 转化熊胆粉中药材标准草案

     2. 转化熊胆粉中药材标准起草说明

海南省药品监督管理局

2022年7月27日

附件列表：
转化熊胆粉中药材质量标准草案-（征求意见稿）.doc

转化熊胆粉中药材质量标准起草说明（征求意见稿）.docx

                                                       标准编号：  

转化熊胆粉

Zhuanhua Xiongdanfen

本品为雉科动物家鸡Gallus gallus domesticus Brisson 的胆汁，通过模拟熊体内胆汁酸生成环境，经酶转化加工制成的干燥品。

【性状】本品呈不规则碎片、颗粒和粉末状；黄色至深棕色；略有光泽，质脆，易吸潮。气清香微腥，味极苦、微回甜。

【鉴别】取本品粉末50mg，加10%氢氧化钠溶液5ml，超声使溶解，置沸水浴中加热水解2小时，放冷，滴加盐酸调节pH值至2～3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊去氧胆酸对照品和鹅去氧胆酸对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2020年版通则0502）试验，吸取供试品溶液和鹅去氧胆酸对照品溶液4µl、熊去氧胆酸对照品溶液5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷—乙醚—冰醋酸—正丁醇—水（10:5:5:3:1）上层溶液（临用新配）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】

水分不得过6.0%（中国药典2020年版四部通则0832第二法）。

微生物限度  取本品适量，用适量的胰酪大豆胨液体培养基稀释并制成1:10、1:100的供试液。需氧菌总数，采用薄膜过滤法处理，取1:100的供试液1ml，加至pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 ml中，混匀，过滤后，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗（每膜不少于200 ml）；霉菌和酵母菌总数，取1:10供试液1 ml，采用平皿法中的倾注法处理；依法检查（通则1108）。每1g供试品中需氧菌总数不得过10⁵ cfu，霉菌和酵母菌总数不得过10³ cfu。

大肠埃希菌：取1:10供试液10 ml，接种至不少于100 ml胰酪大豆胨液体培养基中检查，依法检查（通则1108）。每1g供试品中不得检出大肠埃希菌。

沙门菌：取本品10g，接种至不少于200 ml胰酪大豆胨液体培养基，依法检查（通则1108）。每10g供试品中不得检出沙门菌。

耐胆盐革兰阴性菌：取1:10供试液，在20~25℃培养2小时并作为预培养物，取相当于0.1g、0.01g和0.001g供试品的预培养物，分别接种至不少于10 ml肠道菌增菌液体培养基中，依法检查（通则1108）。每1g供试品中耐胆盐革兰阴性菌应小于10⁴ cfu。

金黄色葡萄球菌：取1:10供试液10ml，接种至不少于100 ml胰酪大豆胨液体培养基，依法检查（通则1106）。每1g供试品中不得检出金黄色葡萄球菌。

铜绿假单胞菌：取1:10供试液10 ml，接种至不少于100 ml胰酪大豆胨液体培养基，依法检查（通则1106）。每1g供试品中不得检出铜绿假单胞菌。

猪、牛、羊胆　取本品粉末，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为供试品溶液。另取猪胆粉对照药材、牛胆粉对照药材、羊胆粉对照药材适量，分别加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2020年版四部附录0502)试验，吸取上述各溶液各5~10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以异戊醇-冰醋酸-水(18:5:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸溶液，于100℃加热约5分钟，至斑点显色清晰，立即检视，并置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与各对照药材色谱相同的位置上，不得显完全相一致的斑点。

【特征图谱】照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验同【含量测定】项。

参照物溶液的制备取牛磺胆酸钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含牛磺胆酸钠0.2mg（相当于牛磺胆酸0.17mg）的溶液，作为对照品参照物溶液。另取【含量测定】项下的对照品溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备同【含量测定】项。

测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品特征图谱中呈现9个特征峰，其中峰3、峰5、峰9应分别与相应对照品参照物峰保留时间相对应。以牛磺胆酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算峰1、峰2、峰4、峰6、峰7、峰8与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%之内，规定值为：0.28（峰1）、0.46（峰2）、0.97（峰4）、1.14（峰6）、1.85（峰7）、2.00（峰8）。

峰3：牛磺熊去氧胆酸；峰5（S）：牛磺胆酸；峰9：牛磺鹅去氧胆酸

参考色谱柱：Phenomenex Kinetex^®00D-4462-E0（100mm×4.6mm，2.6µm）

【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，混合溶液（称取磷酸二氢钠2.34g和庚烷磺酸钠1.0g溶于350ml水中，超声混匀）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为0.8ml·min^-1；检测波长为210nm。理论板数按牛磺熊去氧胆酸峰计算应不低于5000。

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0~25	23→29	77→71
25~30	29→29.5	71→70.5

对照品溶液的制备取牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸0.30mg、牛磺鹅去氧胆酸钠0.17mg（按牛磺鹅去氧胆酸=牛磺鹅去氧胆酸钠×0.96折算）的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品粗粉约50mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率240W，频率40kHz）至完全溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22µm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含牛磺熊去氧胆酸（C₂₆H₄₅NO₆S）不得少于28.0%，牛磺鹅去氧胆酸（C₂₆H₄₅NO₆S）不得少于15.0%，两者含量之和不得少于45.0%，牛磺熊去氧胆酸与牛磺鹅去氧胆酸的含量比值为1.3~2.0:1。

【饮片】 取原药材，研细。呈颗粒和粉末状；黄色至深棕色；略有光泽，质脆，易吸潮。气清香微腥，味极苦、微回甜。

【性味与归经】苦、寒。归肝、胆、心经。

【功能与主治】清热，平肝，明目。用于惊风抽搐，外治目赤肿痛，咽喉肿痛。

【用法用量】0.3~1g，多入丸散服。外用适量，研末或水调涂敷患处。

【贮藏】密封，避光，置阴凉干燥处。

标准起草单位: 海南海口金熊药业有限公司

标准复核单位：海南省药品检验所