自噬研究：快到碗里来！

最近自噬的研究都很火，耐药不耐药，凋亡不凋亡的都开始往上扯了。

这篇文章的题目是：'Ulinastatin Reduces the Resistance of Liver Cancer Cells to Epirubicin by Inhibiting Autophagy'，基本上可以作为入门级自噬研究的参考模板了。

文章思路是这样的：首先文章证明了EPI能诱导肝癌细胞自噬，而UTI能抑制这样的自噬；然后UTI能促进EPI诱导的细胞凋亡；接着证明UTI是抑制自噬从而促进了EPI诱导的凋亡；然后证明了UTI是通过NF-kB信号通路起到了这样的作用；最后做了一下成瘤实验。

我们就看第一个Fig，就基本能了解自噬他们究竟做了点啥。

自噬研究基本可以分这样几个层次：

1.证明自噬参与了你的研究表型：western检测LC3，p62；LC3双荧光测细胞自噬流；电镜观测自噬；

自噬形成时胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

但LC3的抗体会对LC3-II有更高的亲和力，所以往往会造成假阳性。所以通常会使用LC3的亚细胞结构定位来辅助实验。比如这篇文章所采用的就是HanBio Inc.（汉恒生物）的mRFP-GFP-LC3的腺病毒进行分析的。

2.证明自噬在你的表型中起了关键作用：加自噬抑制剂3-MA，激动剂rapamycin等，然后检测表型（功能）；

这里就用到了两种自噬抑制剂：3-MA和CQ（Chloroquine）。

3.找到表型与自噬衔接的分子：检测自噬通路如pI3K 通路，Beclin-1，ATG家族各成员,看看哪个与表型呈现正相关变化;

4.基因操作3中的分子,检测自噬和表型：说明该分子在衔接自噬和表型中的作用机制;

这一点需要运用到的也就是柯霍氏法则和回复实验。

…华丽丽的分割线…

李莫愁博士：而普通的自噬研究，也就是这样一个模式：（感谢汉恒生物的蔡博士为我们整理）

自噬表型研究中，较为常用的就是采用汉恒的mRFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒，对细胞进行了感染。mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。

就像是这样：

（2014，Kidney International，IF=7.916）

（该实验所用自噬工具为汉恒生物Ad-mRFP-GFP-LC3双标腺病毒）

好啦，今天就策到这里了。