35不同炮制方法对附子中乌头总碱和双酯型生物碱含量的影响

ournalofChineseMedicina；9·；验结果可以看到巴戟天药材中含有丰富的微量元素Fe；Cd是一种毒性极强的累积性的环境污染物，能够对人；不同炮制方法不单止使药材微量元素含量产生；〔7〕；变化，而且会对微量元素的溶出产生影响；Mn、Zn、Cu含量均有不同程度的降低，元素Fe；巴戟天药材一般以水煎液入药，日后可以进一步研究不；〔9〕；参考文献

JournalofChineseMedicinalMaterials第34卷第1期2011年1月·3

9·

验结果可以看到巴戟天药材中含有丰富的微量元素Fe、Mn、Zn、Cu，这些微量元素与巴戟天温补肾阳、滋补壮阳、强筋壮骨、祛除风湿的功效有一定的关〔3〕系。

Cd是一种毒性极强的累积性的环境污染物，能够对人类健康造成不良影响。Cd在体内积聚对肾、肝、骨、生殖系统、免疫系统都有损害，而且还有致癌、致畸、致突变作用。从实验结果可见经过盐制和甘草制以后，有害元素Cd含量也降低。重金属超标是影响中药材质量的一个重要因素，一定的炮制方法能否有效地降低中药材重金属含量呢，还有待以后进行更深入的研究。

不同炮制方法不单止使药材微量元素含量产生

〔7〕

变化，而且会对微量元素的溶出产生影响。虽然本实验结果显示经炮制后巴戟天中人身体必须微量

Mn、Zn、Cu含量均有不同程度的降低，元素Fe、是否会对巴戟天的药效有影响呢，还有待进一步的研究。

巴戟天药材一般以水煎液入药，日后可以进一步研究不同炮制方法对巴戟天药材微量元素溶出的影响，从而更全面地评价不同的炮制方法对巴戟天药材药效的影响。

〔9〕

参考文献

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不同炮制方法对附子中乌头总碱

和双酯型生物碱含量的影响

*

纳，侯大斌，刘向鸿

(西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳621000)

赵

摘要目的:探讨不同炮制方法对附子中有效成分含量的影响。方法:分别采用炒法、蒸法、胆水浸泡及混合

溶液浸泡对附子进行炮制。采用UV和RP-HPLC方法分别测定附子四种加工品中总生物碱和新乌头碱、乌头碱、次乌头碱等双酯型生物碱的含量。结果表明:附子不同炮制品中生物碱的含量呈现明显的差异，蒸制品和炒制品含量可以达到中国药典规定酯型生物碱以乌头碱计，不得过0.15%的规定。结论:不同炮制方法对附子生物碱含量有显著影响。

关键词

附子;炮制;HPLC;乌头碱;双酯型生物碱

文献标识码:A

4454(2011)01-0039-04文章编号:1001-中图分类号:R283.1

附子为毛茛科乌头AconitumcarmichaeliDebx.的子根的加工品

〔1〕

学与药理研究已经表明生物碱类成分是附子的主要有效成分和毒性成分，其中双酯型生物碱既是重要的有效成分，也是剧毒成分。附子中双酯型生物碱最具代表性的为:乌头碱(aconitine)、新乌头碱

。具有回阳救逆、补火助阳、逐

风寒驱湿邪的功效。在中国的药用历史和栽培历史

悠久，是中国常用的中药和四川道地药材。现代化

07-12收稿日期:2010-“十一五”22)基金项目:国家科技支撑计划重大专项课题(2007BAD89B15);四川省农作物育种攻关课题(2006YZGG12-)，mail:[e-mail]。作者简介:赵纳(1985-女，硕士研究生，主要从事药用植物资源的开发与利用研究;E-*

Tel:[phone]，E-mail:[e-mail]。通讯作者:侯大斌，

·4

0·JournalofChineseMedicinalMaterials第34卷第1期2011年1月

(mesaconitine)与次乌头碱(hypaconitine)〔2〕等。乌头类药材生品毒性比较大，临床用量较小，故一般需经炮制后方能入药。附子的毒性与炮制方法息息相关，炮制不及，则可中毒;炮制太过，则不能保证药效。附子的炮制不但要考虑减毒，更应重视存效。本实验中采用炒法、蒸法、胆水处理及胆水、盐水混合处理对附子进行炮制。初步探讨了四种炮制方法对其炮制品中双酯型生物碱的含量影响，以期为附子的炮制工艺和质量控制研究提供科学依据。1材料、试剂和仪器1.1

材料购于四川江油附子GAP基地，经西南科技大学侯大斌教授鉴定为乌头Aconitumcar-材料

后烘干至恒重，粉碎，过60目筛。

2.2乌头类总生物碱含量测定采用酸性染料比色法

〔3〕

测定附子中乌头类总生物碱含量，以乌头碱

标品为对照做标准曲线，以乌头碱的浓度(μg/mL)

为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求得r2=0.9995，回归方程:Y=0.0445x+0.0017，乌头碱含量在2～20μg/mL范围内，其光密度与乌头碱浓度呈良好的线性关系。称取生附子和各炮制品粉末3份，生附子0.2g，其他0.5g，进行含量测定，结果见表1。结果表明，炮制前生附子中乌头类总生物的含量为5645(mg/kg)，炮制后附子中乌头类总生物碱含量均有不同程度的减少。

表1样品生附子炒制品蒸制品胆制品混合制品

56452645289326002690

－2501288425602582

附子各炮制品中乌头类总生物碱含量测定结果

含量/(mg/kg)

－2465265025282533

－2411261424742519

－2330255524382515

michaeliDebx.的子根。1.29403)、乌头碱试剂新乌头碱(0799-(110720-200409)、9403)对照品均次乌头碱(0798-购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯(美国Fedia公司)，其他药品为分析纯，水为超纯水。1.3

Varian1200LC/MS液相色谱-质谱联用仪(带紫外检测器，美国Varian公司)，旋转蒸发仪(Buchi公司)，电子分析天平(Sartorius公司)，优

仪器

普超纯水制造系统(上海优普实业有限公司)，超声

T6S紫外可波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，

见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，中草

药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)。22.1

方法与结果

样品的制备

2.1.1生附子:取新鲜附子，除去须根及泥沙，冲洗干净。装入牛皮纸袋内，烘干至恒重，粉碎过60目筛，装于密封袋内，备用。2.1.2

附子炒制品:取适量附子生品于炒锅中，加热过程中火力大小一定，并不断搅拌使之受热均匀。40、60、80、100、120min。炒的时间梯度依次为20、

迅速取出后烘干至恒重.粉碎，过60目筛。2.1.3

附子蒸制品:取适量完整生附子，装入牛皮纸袋放入高压蒸汽灭菌锅内。在121℃(蒸汽压力

注:从左至右炮制时间递增

2.32.3.1

HPLC法测定双酯型生物碱的含量

色谱条件:美国ZorbaxextendC18(150mm

×4.6mm，5.0μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%乙二胺;梯度洗脱，时间程序为0→15→30→35→60min，乙腈体积分数相应为35%→50%→75%→35%→35%;流速为1.0mL/min;进样量20μL;柱温为30℃;检测波长240nm。2.3.2

对照品溶液的配制:精密称取新乌头碱、乌

头碱、次乌头碱适量，分别置于10mL的容量瓶中，用甲醇色谱纯溶解并定容，摇匀，作为对照品储备液，其他不同浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。2.3.3

供试品溶液的配制:称取附子不同的炮制

加浓氨试液8mol/L润湿，加品各2g(平行3次)，

0.1MPa)蒸制，30、将蒸的时间进行梯度设置为20、

40、50、60min。取出后烘干至恒重，粉碎，过60目筛。2.1.4

附子胆水处理制品:取适量完整生附子，浸

入胆水溶液(胆水浓度50%，温度30℃)中浸泡3、

乙醚80mL，超声处理50min，过滤，并用乙醚洗涤，

收集、合并所有滤液，浓缩，挥干溶剂。加入甲醇溶解残渣，定容到10mL的容量瓶;称取生附子粉0.5g，加浓氨2mL润湿，加乙醚20mL，其余步骤同炮制品的处理方法。

2.3.4线性关系的考察:分别取对照品溶液稀释

“2.3.1”不同倍数，进行HPLC测定。按照色谱条件测定峰面积，以平均峰面积(Y)对应对照品进样量μg(X)进行线性回归，得回归方程新乌头碱Y1=126922X1－41228，R21=0.9997;乌头碱Y2=114548X2

6、9、12、15d。取出后烘干至恒重，粉碎，过60目

筛。2.1.5

附子胆水、盐水混合处理制品:取适量完整

生附子，浸入混合液(胆水∶水∶食盐的混合比为

1.3∶1∶1，6、9、12、15d。取出温度30℃)中浸泡3、

JournalofChineseMedicinalMaterials第34卷第1期2011年1月·4

1·

+11483，R22=0.9999;次乌头碱Y3=174043X3－62020，R2结果表明，新乌头碱、乌头碱、次3=0.9996，3～450μg、20～650μg范围乌头碱在40～3000μg、内具有良好的线性关系。2.3.5

精密度试验:精密吸取附子炒制品(20

min)的供试溶液20μL，重复进样5次，测定新乌头

表2新乌头碱、乌头碱、次乌头碱加样回收试验(n=3)

取样量原含量加样量测定量回收率平均回

/g/mg/mg/mg/%收率/%

RSD

/%1.46

新乌头碱0.1040.34020.1030.34250.1030.3384

0.40.30.3

0.763098.770.642099.850.634698.55

99.06

碱、乌头碱、次乌头碱峰面积，计算RSD分别为1.15%、1.63%、1.01%。2.3.6

稳定性试验:取同一炒制品(20min)供试

2、4、6、8h进样20μL，品溶液，分别于0、记录峰面

乌头碱0.1060.08480.1020.08350.1030.0843

0.080.164199.170.080.162098.200.040.123699.170.40.40.4

0.841099.820.842199.710.8523100.04

98.852.01

次乌头碱0.1020.4480.1060.44340.1080.4521

99.871.87

积。其新乌头碱、乌头碱、次乌头碱峰面积平均值为

68522816、1351750、22989120，RSD分别为1.52%、2.23%、1.47%。表明供试品溶液在8h内稳定。2.3.7加样回收率试验:精密称量附子胆制品0.1g，共3份，每份分别准确加入各标准储备液，按上述方法测定含量，计算回收率，结果见表2。

表3炮制方法蒸法

新乌头碱/

(mg/kg)456.235680.895106.75659.36538.3853013.861318.699208.007187.62248.2353402.0123318.2182684.4982125.1011847.0562395.3701770.1761435.853945.779816.698

2.3.8

样品含量测定:吸取附子各炮制品供试液

20μL，每个供试品溶液测定3次，按“2.3.1”项下色谱条件下测定附子中三种双酯型生物碱的含量，结果见表3。

乌头碱/(mg/kg)559.379200.76921.7338.863－85.09952.49243.70839.5713.73684.916408.222344.297266.081211.636337.847319.607230.569167.312150.186

次乌头碱/(mg/kg)511.550601.160248.753151.22618.850739.091270.534208.063189.66821.744441.752381.392521.508189.31890.223223.270156.57081.550140.93789.570

酯型生物碱合计/

(mg/kg)

1527.1641482.823377.215219.45457.2073818.051641.725459.779416.86273.7153928.6794107.8333550.3032606.5002148.9152956.4882246.3521747.9721254.0251056.454

附子不同炮制品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量(n=3)炮制时间20min30min40min50min60min

炒法20min40min60min80min100min

胆水处理3d6d9d12d15d

盐水、胆水混合处理3d6d9d12d15d

33.1

讨论与小结

生物碱是附子的主要毒性成分和活性成分，中易于水解，在水解过程中毒性逐渐降低，药理作用

也逐渐减弱。现有的炮制方法也是利用湿热等方法来促进双酯型生物碱水解达到降毒作用。

本研究采用蒸法、炒法、胆水处理及盐水、胆水混合处理对附子进行炮制。炮制前生附子中乌头类总生物的含量高达为5645(mg/kg)，炮制后生物碱

关于生物碱研究较多的含量测定方法主要集中于双

酯型生物碱等成分的测定。双酯型生物碱(包括乌头碱、次乌头碱和中乌头碱等)是导致使用附子中毒的主要成分。这类成分性质不稳定，在湿热过程

·4

2·JournalofChineseMedicinalMaterials第34卷第1期2011年1月

含量均有不同程度的降低。蒸法20min、炒法100min炮制品含量比生附子分别减少了48.76%、58.72%，蒸法20min炮制品在四种炮制品中含量损失最小，而炒法100min炮制品在四种炮制品中生物碱含量损失最大，可能由于在炒制过程中，随着时间的延长，部分附子出现了糊化，对含量测定产生影响。在相同的炮制时间内，蒸法炮制乌头类总生物碱含量下降的速度均比炒法炮制要快。胆水处理、混合处理炮品含量比生附子均减少50%以上，且随着炮制时间的增加，胆水处理比混合处理的生物碱含量流失大，这也为江油附子炮制前期处理中，采用胆水和盐水混合溶液浸泡提供一定的理论依

〔1〕

据。2005年版中国药典规定，制川乌中规定，本品含生物碱以乌头碱计(C34H47NO11)，不得少于0.20%。炮制品中生物碱含量均高于0.20%，符合制川乌生物碱要求。本品含酯型生物碱以乌头碱

〔4〕

(C34H47NO11)计，不得过0.15%。为了测定炮制品中双酯型生物碱的含量，采用高效液相色谱法测定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量。3.2

高效液相色谱法具有快速简便、准确性好、灵敏度高等优点，是物质含量分析的一种常用方法。附子生品中双酯型生物碱为3994.842mg/kg，其中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱含量分别为2982.075、404.609、608.158mg/kg，四种炮制品中双酯型乌头碱含量均随着时间的增加呈总体下降的趋势。其蒸法炮制双酯型乌头碱含量最低，下降最快。蒸制60min已不能检测出乌头碱的含量。蒸制品中总生物碱含量较其他炮制品要高，而酯型生物碱的含量较

低。王昌利等通过测定不同炮制条件附子总生物碱

及酯型生物碱的含量也表明，蒸制10h附子中总生

〔4〕物碱含量较高，酯型生物碱含量较低。炒制100min，双酯型乌头碱中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱

0.92%、3.50%。含量分别降为附子生品的1.62%、

附子在炒制过程中双酯型生物碱呈减少的趋势，在20～40min新乌头碱的含量减少尤为明显。在不同溶液浸泡中，双酯型生物碱含量总体均呈明显减少趋势，达到初步解毒的目的。在药品生产管理和临床运用中常以新乌头碱、乌头碱、次乌头碱之和代表

〔5〕

附子的双酯型生物碱含量。胆制品和混合处理制品中均不能达到中国药典之规定，说明仅靠溶液浸泡处理附子，很难使其中有毒成分降低到安全范围，还需要其他炮制处理工序。

参

考

文

献

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檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽檽

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