打开APP
userphoto
未登录

开通VIP,畅享免费电子书等14项超值服

开通VIP
蛋白质组学技术新宠-DIA

DIA综合了DDA和SRM的优势。在DIA分析中,指定质荷比(m/z)窗口内的所有肽段都经过裂解;分析重复,直至质谱仪覆盖整个m/z范围,采集所有母离子的碎片离子信息进行蛋白定性和定量。示意图如下。

与DDA相比,DIA技术优势

  • 全景式扫描,数据无遗漏,定量准确性大大提高

  • 不受样本量限制,重复性好,适合大样本量

  • 数据可回溯


空说无凭,文章才是硬实力

这篇文章发表在蛋白组学主流杂志JPR(IF:4.28)上,由下图我们不难发现相同的样本DIA比DDA鉴定出多一倍的肽段和蛋白数目(蛋白数目DIA:1301,DDA:638),因此缺失值大大减少。此外,DIA的肽段和蛋白定量变异系数CV值分别为6.7%和8.1%,DDA的肽段和蛋白定量CV值分别为15.7%和16.3%,可见DIA定量更准确。

类似的,下面这篇发表在蛋白组学顶级杂志Molecular & Cellular Proteomics(IF:6.5)上的文章也得出相同的结论。

小编闭嘴了,各位童鞋请看图。

接下来的这篇文章十分有趣,我们知道实验结果的重复性是进行科学研究的基础。Ruedi Aebersold教授联合全球不同地点的11家质谱实验室,采用相同的实验和分析流程,对SWATH(DIA)技术进行综合评估。


该研究团队将同一份样品分成相同的11份分发给全球范围内的11个实验室,分别评估1天、1周内不同地点的 DIA 数据采集情况。

1.蛋白鉴定情况

在全球11个实验室采集的229份SWATH-MS数据中,过滤条件为蛋白水平FDR 1%,共检测到4984种蛋白,4077种蛋白在超过80%的样本中被检测到。

2.定量重现性

经过肽段水平的中位数均一化后,利用4077种在超过80%样本中检测到的蛋白去计算同一天内、不同天内、不同实验室数据采集之间的变异系数,分别是8.3 ± 16.2%, 11.9 ± 17.2%, and 22.0 ± 17.4%。


3.线性和动态范围

利用样本中加入的同位素标准肽段,在每个实验室计算梯度浓度设置的标准肽定量结果线性拟合系数,平均决定系数(R2)是0.97。去除高浓度肽段信号饱和的点,决定系数增加到0.99。在样本之间设置的标准肽理论倍数有9和27,实际检测到的差异倍数是7.49和19.6,主要原因也是高浓度的标准肽已经导致质谱仪信号检测饱和。


4.SWATH-MS灵敏度和MS1相比较

SWATH-MS的LLOQ(甚低定量限)在10-18到10-15摩尔每μg样本。在数据分析上,本研究比较了利用MS1定量和SWATH-MS定量的LLOQ。SWATH-MS的信号在低水平浓度情况下,不易受母离子信号干扰,所以,LLOQ比MS1定量方法低1个数量级,SWATH-MS定量灵敏性更优。

5.全球范围内蛋白定量丰度的相似性比较

研究衡量不同实验室定量结果的相似性,计算了229个数据之间任意两个的泊松相关系数,最低是0.868,中位数是0.94。另外,单独计算了每个实验室内采集数据的相关性,泊松系数是0.948到0.984,中位数是0.971。说明,数据采集地点的不同对定量结果影响极小。

该文章最后得出不同实验室采用DIA/SWATH技术可得到重现性很好的蛋白组定量数据,本研究为DIA/SWATH技术在大规模蛋白定量领域开展应用确定基础。

本站仅提供存储服务,所有内容均由用户发布,如发现有害或侵权内容,请点击举报
打开APP,阅读全文并永久保存 查看更多类似文章
猜你喜欢
类似文章
【热】打开小程序,算一算2024你的财运
基于MS/MS的数据非依赖法非标记定量蛋白质组学蛋白质互作分析(五)
华大科技
靶向蛋白组学定量(MRM/SMR,PRM)和SWATH技术
常见的质谱扫描模式丨SWATH
生物药的研发(二) 宿主细胞蛋白残留分析
声音专栏| MicroLC微流液相色谱技术,以综合实力胜出(下)
更多类似文章 >>
生活服务
热点新闻
分享 收藏 导长图 关注 下载文章
绑定账号成功
后续可登录账号畅享VIP特权!
如果VIP功能使用有故障,
可点击这里联系客服!

联系客服