临床化学常用的分析方法

 临床生化检验的自动化主要应用了下列技术：光谱技术、电化学分析技术、层析技术、电泳技术、离心技术、抗原抗体特异性反应和标记技术、核酸扩增、杂交及序列分析技术等，其中生化分析仪主要运用了光谱技术中的吸收光谱法和比浊法。分别介绍如下:

吸收光谱法

也称比色法，遵循的是朗伯－比尔定律，Lamber-Beer定律的意义为：某均一溶液的吸光度等于该物质的吸光系数、浓度C和光径L(cm)的乘积，当光径不变时，浓度和吸光度成正比，这是生化分析仪利用吸收光谱法进行定量测定的基础，见下图：

Lamber-Beer定律成立的前提条件是：
(1)被吸收光为单色平行光，
(2)待测定溶液为均一稀溶液。

除特种蛋白外的大部分临床生化项目，配以相应的试剂，均可利用比色法在生化分析仪上进行测定

比浊法

带有小粒的悬浮液和胶体溶液都具有向四面八方散射入射光的性质，当一束平行光通过含有悬浮质点的悬浮液或胶体溶液时，同时受到散射和吸收两个因素的影响，使光的强度减弱。在光源的光路方向上测量透射光强度与入射光强度比值，并通过该比值测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为透射比浊法，在光路的其他方向上测定测量散射光强度，从而测定出悬浮液或胶体溶液中质点的溶度，称为散射比浊法。

透射比浊法适用于待测颗粒大小与光源波长接近的实验; 散射比浊法适用于颗粒大小远小于光源波长的实验

反应类型

生化分析仪测定方法的分类

各项目的计算方法决定于其所采用的测定方法和定标模式，临床生化检验测定方法总的来说可分为三大类：终点法，动力学法和固定时间法。

终点法
指经过一段时间的反应，反应达到平衡终点，由于反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的变化程度与被测定物的浓度成正比。

在多数生化仪上可以用第二检测波长去消除干扰，试剂上由于组份不同，或是出于试剂稳定性考虑会制备成单试剂、双试剂、三试剂等，这样就会细分出一些小的分类：单试剂单波长终点法,单试剂双波长终点法,双试剂单波长终点法,双试剂双波长终点法

固定时间法

又叫一级动力学法，初速率法，二点动力学法
在一固定时间间隔中,底物浓度的变化量正比于底物的初浓度,这是一级反应的通性.该段时间内吸光度的增加或降低与被测定物的浓度成正比.

动力学法

又叫零级动力学法和连续监测法，多用于酶类的测定
反应时加入试剂，再加入样本，在合适的时间内，吸光度匀速变化，变化的速率和反应物的浓度成线性关系。

PS:常用的几个概念

试剂空白
由于生化测试测量的均为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣

除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测

量

样本空白
由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的

测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏

水或生理盐水来进行测量。

水空白 
比色杯在加入水以后的吸光度

定标类型

生化项目的 定标类型主要有线性定标和非线性定标，在Beckman AU系列生化仪上关于定标类型主要有6种形式，AA,AB,7AB,MB,7MB,nAB，

非线性化学分析物包含药物与特定的蛋白质分析。不像一级速率及终点化学分析物会对增加的浓度呈现出线性回应，非线性化学分析物校正曲线会呈现出对数 （S 形）回应或其他非线性的关系。有鉴于此，故采用曲线契合插补方式以构成校正曲线。

对于有些非线性校正，试剂批次曲线参数在制造过程中便计算出来。将曲线参数编为条码形式，通过试剂盒随附的扫描卡加载至系统。然后运行单点校正以调整仪器间的差异。如果需要，校正可包括样品稀释剂(DIL1) 作为空白，从全部校正剂或样品回应中减去。

计算模型

无论哪种定标类型，想最终得出我们想要的实验结果，都得通过相应的数学公式运算得出结果，线性校正的公式就比较简单了，待测结果会和吸光度或吸光度变化成正反比，非线性的多点校正，就得运用一些复杂的数学函数模型了，这些通常是比浊或药物实验。在Beckman DXC系列仪器上定标数学模型大体分为以下几种：

1. Linear线性模式，这个就适用于最常见的终点法速率法。

2. Math Model 1 - 4 Parameter Log-logit function，1号数学模型是使用抗体的试剂最常用的四个参数日志逻辑
函数。

样品值使用计算的曲线参数及数学模型来决定。由于该模式
可解出浓度，故能直接计算数值。

2. Math Model 2 - 5 Parameter Logit function，2号数学模型是五个参数逻辑函数。

该函数不能直接解出浓度。仪器使用交互方式来决定样品值。

3. Math Model 3 - 5 Parameter Exponential function，3号数学模型是五个参数指数函数。

该函数不能直接解出浓度。仪器使用交互方式来决定样品值。

4. Math Model 8 - Alternative to Model 2, 5- Parameter Logit function，8号数学模型是2 号模型，五个参数逻辑函数的替代模型。

该函数不能直接解出浓度。仪器使用交互方式来决定样品值。

5. Math Model 9 - Extension to Model 1, 4 Parameter Log-logit function，9号数学模型是1号模型，四个参数日志逻辑函数的扩充模型。

“c”可以是 +1 或 -1。
若c = +1，则等于 1 号模型。
若c = -1，则使用了替代函数。
该函数不能直接解出浓度。仪器使用交互方式来决定样品值。

在东芝生化上的检测方法定义也基本类似：

需要注意的的好多仪器都有的SPline，这个数学模型适用于随浓度升高而吸光度表现为收束的反应曲线。在数学中，样条是一个数值函数是分段的多项式函数。

可以这样理解:是一种以节点控制弯曲程度的顺滑的自由曲线,通过编辑(移动\增加\删除)节点可以很容易的调节曲线的曲率和走向,对于刻画不规则的轮廓非常方便.

综上所述，对于反应检测原理、反应类型、定标类型、数学模型有了了解之后，我们会在自动生化检测会有更深的理解，对于调整试验参数会更加得心应手些。