在《人外周血调节性T细胞鉴定方案》中，我们用到了CD45这个指标圈门。有疑问指出：人外周血中，所有的白细胞表面都表达CD45，做外周血的样本不需要多此一举，去添加一个CD45抗体。通过FSC/SSC，就能直接圈出淋巴细胞亚群。
做免疫细胞分型时，CD45真的可有可无吗？下面我们来聊一聊，CD45的特点，及通过CD45与SSC-H来圈出淋巴细胞亚群的意义。
CD45由一类结构相似、分子量较大的跨膜蛋白组成，广泛存在于白细胞表面。CD45分子在所有白细胞上都有表达，是细胞膜上信号传导的关键分子，在淋巴细胞的发育成熟，功能调节及信号传递中具有重要意义，其分布可作为某些T细胞亚群的分类标志。
图一：CD45/SSC-H与FSC-H/SSC-H分群对比
❖ 如左图所示，通过CD45与SSC-H，可以非常快速地圈出淋巴细胞亚群。
❖ 如右图所示，使用FSC-H与SSC-H确定细胞群分布时，如果不染CD45，加上有时红细胞裂解效果不佳，淋巴细胞群容易与红细胞及细胞碎片分群不清晰，且易有单核细胞混杂，不利于圈门位置的确定。而通过CD45/SSC圈门，可以使圈出的淋巴细胞更纯。
中华人民共和国卫生行业标准文件中的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》也指出：建议联合CD45和SSC设门，确定淋巴细胞群。淋巴细胞群通常呈现CD45强阳性和SSC弱表达；相对于淋巴细胞，单核细胞的CD45呈弱表达，SSC呈中等强度表达；嗜碱性粒细胞的CD45和SSC均为弱表达。同时，CD45在三色、四色抗体组合方案的每一检测标本管中均存在，在对淋巴细胞群进行设门的同时，也具有监测和评估标本管间变异性的作用。
图二：外周血CD45与SSC细胞分群散点图
那么，在哪些情况下，一定要染CD45呢？
例如，有些病人的外周血样本分布，与正常样本存在较大差异时，必须通过CD45来分出淋巴细胞亚群。
此外，目前研究较多的肿瘤样本，在检测免疫细胞分群时，也一定要染CD45。因为肿瘤组织处理的单细胞悬液中，大部分是肿瘤细胞与组织细胞，免疫细胞的含量一般较少，如果不染CD45，将导致结果无法分析。
综上，当样本处理不佳或样本类型特殊，无法通过FSC/SSC区分出明确的免疫细胞形态时，联合CD45及SSC设门，是十分关键且必要的。
联系客服
