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基于Edman降解法的蛋白N-端测序步骤

Edman法测定单个氨基酸循环包括3步:第一步是在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合;第二步是在酸性溶液中,N端残基被切除;第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间来确定氨基酸种类。

测序步骤:蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离,保证样品的纯度满足测序的要求;随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上;经过染色确定把蛋白条带并切出;Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。测序原理如图1所示:

图1 Edman降解法测序原理

Edman测序(N端测序)机器型号:PPSQ-31A

图2 PPSQ-31A 蛋白质N端测序仪器

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