自噬好像还算是个热点,作为一个热点的话,那研究的话,有些什么实验呢?
最最常见的,无非就是电镜:
但是电镜并不足以说明分子水平的机制,于是就出现了大量的自噬的靶标,比如Atg8/LC3等等,但刚开始都是做一些WB来进行验证:
这类WB,经常会±自噬抑制剂来进行实验,看看是不是与自噬有关。当然,就算是LC3 I和LC3 II看上去结果也是比较单薄的,于是就诞生了GFP-Atg8/LC3,用融合的GFP被降解下来,说明自噬的形成:
当然,同样,也有用荧光电镜来检测的:
这种降解GFP的方法可以验证自噬,但其实更直接的方法,就是直接给自噬体加上荧光,然后用confocal来进行验证:
当然,流式验证,也能说明自噬体形成的问题:
当然,除了自噬本身的标记蛋白LC3或者Atg以外,还有很多自噬底物的检测,比如SQSTM1这样的蛋白:
自噬被抑制后,这个蛋白就开始累积了。好吧,一般在文献中管这个基因叫P62。
而MTOR, AMPK,Atg1/ULK1的激酶活性也是检测自噬的常见桥段:
除了这些,还有就是不是特别常见的内源性的WIPI检测,但这个价钱就比较高了:
李莫愁博士:今天先讲这些吧,这些其实也就是常见的Autophagy研究中的桥段了,具体怎么用,就看你们自己的研究啦。好了,今天就先策到这里吧。
联系客服