【选修1】2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、筛选菌株

1.实验室微生物的筛选原理

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 

2.土壤中分解尿素的细菌的分离原理

土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

①选择 培养基的成分：尿素作为唯一的氮源

②鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素

3.选择培养基

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。加入青霉素的培养基：细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物。

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二、统计菌落数目的方法

（1）显微镜直接计数法：

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②方法：用计数板计数。

③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法(活菌计数法)：

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

③操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30～300的平板进行计数。

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三、实验设计

1.土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 

2.制备培养基 

牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，判断选择培养基是否起到选择作用。  

3.样品稀释、取样涂布

因为土壤中 各类微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 

注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握 ，因此选择了一个较为宽泛 的范围 ：稀释倍数为10³～10⁷。

4.微生物的培养、观察并记录结果

将涂布好的培养皿放在30℃下培养。比较 牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录 。 

不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间

5.细菌的计数 

当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 

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