科研：气泡对CCK8实验有多少影响？

常记溪亭日暮，沉醉不知归路。

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前言

无言！

01 

CCK8实验是检测细胞增殖的常见实验。

做CCK8实验的时候，尽量避免气泡，但是偶尔不小心有了气泡怎么办？这个气泡对实验结果到底有多大的影响？

02 实验

左边没有明显的气泡，右侧的培养基都有气泡，第三个孔气泡非常多。

结果如何？

少量气泡对检测结果影响不大，但是大量气泡会导致检测值明显升高。

03 实验原理

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8），是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。

CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan ，生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。

因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

04

05 特别注意

产物太多，颜色太深，CCK值就会特别高，特别高的时候，酶标仪会测不到，值都显示为over，实验就白做了。

所以，加入CCK8试剂后，放在培养箱的时间，要摸索，看着颜色明显变深就要拿出来检测，有时候20分钟就可以检测，1个小时的时候，值都显示为over，实验就白做了。特别是每个孔的细胞数为2万个的时候。

06 细胞状态

每次做实验的时候，要是同一批细胞的，这样子研究组、对照组的处理条件相同，细胞状态相同，实验结果才可靠。

07 

如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化（浑浊会影响检测），应洗涤细胞更换培养基后再加 CCK-8检测。

08 

当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔的培养基最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。

09 

               杨柳岸，晓风残月。

视频

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