CCK-8实验方法

前两期我们带大家了解了什么是细胞增殖以及它的实验方法有哪几种。今天我们带大家具体看一下在众多方法中 CCK-8的实验操作步骤。

操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃，5% CO2的条件下)。

2. 向培养板加入10 μl不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性，则不需要2-3步骤，直接从第四步操作。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,  12, 24或48小时)。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。

5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

注意事项:

1）CCK-8试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应，如果待检测体系中有较多还原剂（或抗氧化剂）会造成背景O.D值升高，干扰检测结果。如果实验中有还原剂，请检查背景的O.D值，即测定、比较空白培养基加入药物与不加药物的培养基（含细胞）在加入CCK- 8试剂后的O.D值，如果空白O.D值明显偏高，则说明有反应，应设法去除或折算干扰因素。

2）如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。细胞培养基酚红不影响测定结果。

3）为使CCK-8试剂盒培养基充分混匀，减少CCK-8在移液器上的残留，建议加样前用培养基稀释CCK-8试剂，混匀后加样。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。