PD-1纳米抗体对PD-1/PD-Ls信号通路的影响

T细胞活化与增殖依赖双信号，B7-CD28家族免疫调节中重要协同刺激途径。作为目前发现的共刺激分子家族之一，B7-CD28超家族结构多为Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。B7-CD28家族信号通路严格调控着机体防御微生物感染所需的刺激和抑制信号间的平衡与自身耐受，能产生第二信号调控T细胞应答的激活、抑制及微调。B7-CD28家族还有多种能减弱T细胞应答并促进T细胞耐受的抑制性信号通路。

程序性死亡受体-1（programmed death-1， PD-1）与其配体（programmed death-1 ligands，PD-Ls）构成的PD-1/PD-Ls信号通路是B7-CD28家族较新发现的通路之一。该通路由PD-1（又称CD279）及其两个配体，即程序性死亡受体配体-1（programmed death ligand 1, PD-L1）和程序性死亡受体配体-2（programmed death ligand 2，PD-L2）共同组成。PD-1/PD-Ls信号通路能通过传递抑制性信号来调控T细胞在活化、耐受性及免疫损伤之间的平衡。

PD-1是一个由288个氨基酸组成的I型跨膜受体蛋白，属于CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）共刺激受体家族成员，其具有一个胞外IgV结构域，可与具有两个胞外IgV结构域的PD-L1或PD-L2特异性结合。PD-1/PD-Ls信号通路通过招募Src癌基因同源的酪氨酸蛋白磷酸酶-2减弱抗原识别受体B细胞受体/T细胞受体（BCR/TCR）的信号通路，负调控免疫应答过程，从而调控机体内的免疫平衡。由于PD-L1和PD-L2广泛表达于多种细胞表面，因此PD-1/PD-Ls信号通路在抗病毒感染、免疫排斥和肿瘤免疫方面均发挥着重要作用。

多种肿瘤及肿瘤相关细胞能通过上调PD-Ls的表达抑制CD8+细胞毒性T细胞的功能，从而避免免疫系统对肿瘤细胞的杀伤。阻断PD-1/PD-Ls信号通路不仅可加速肿瘤细胞的清除，还可抑制肿瘤细胞的转移。目前，PD-1单克隆抗体（单抗）药物纳武利尤单抗（Nivolumab）和兰洛利珠单抗（Lambrolizumab，别名派姆单抗）已上市，用于治疗非小细胞肺癌和黑色素瘤。然而，单抗自身具有相对分子质量较大、组织穿透能力较弱以及较难结合至细胞表面的受体和配体结合部位等缺点，此外经济成本较高和靶向针对性差等因素也使得单抗药物在临床治疗上仍存在诸多不足。

纳米抗体是来自骆驼科动物或鲨鱼的非典型免疫球蛋白（IgG2和IgG3）可变区的单域抗体。该抗体天然缺少轻链，是目前能获取的具有完整抗体功能的最小分子片断。纳米抗体的可溶性较高，可在大肠杆菌细胞中高表达，易于制备和耦联于其他效应分子且成本较低。此外，在与抗原结合方面，纳米抗体能结合至酶活中心、受体和配体结合间的裂隙等常规抗体所不易结合的位点。纳米抗体的这些优点使其在抗体结构研究、抗肿瘤治疗和新药研发等方面具有巨大潜力。

近年来，以PD-(L)1单抗为代表的免疫检查点抑制剂(ICIs)在肿瘤治疗领域取得突出成就，已有多株抗PD-1单抗被用于临床试验，多种PD-(L)1单抗相继上市，获批适应证覆盖多个瘤种，但抗PD-1纳米抗体研究还处于发展中赛道。

抗PD-1纳米抗体通过使用PD-1-Fc重组蛋白免疫双峰驼，构建骆驼免疫抗体文库，再采用噬菌体亲和筛选的方法首次筛选出抗PD-1纳米抗体，并对其进行初步的性质分析，以期获取一株亲和力高且特异性强的抗PD-1纳米抗体，为进一步探讨抗PD-1纳米抗体对PD-1/PD-Ls信号通路的影响提供实验基础。

恩沃利单抗（Envafolimab）是全球首个进入临床开发的PD-L1纳米抗体，目前在中国、美国和日本已针对多个肿瘤适应证开展临床试验，显示出了良好的抗肿瘤活性和安全性。目前已获美国食品药品监督管理局(FDA)授予治疗晚期胆道癌(BTC)的孤儿药资格。恩沃利单抗（Envafolimab）在安全性和便捷性上都具有显著优势，它的出现开辟了抗肿瘤免疫治疗新思路。