生命科学技术摘集

生物体在呼吸的过程中，会获得称之为APT的能量，在此过程中，吸入的氧中的2%的氧会转化为活性氧，也被大家所称之为带有自由基的氧。自由基是导致细胞膜氧化，促进老化以及DNA损伤的主要元凶。通过此实验，利用分光光度计，对样品清除自由基的能力进行测定。多肽抗氧化性可以参考国家标准《多肽抗氧化性测定—DPPH和ABTS法》（GB/T 39100-2020），该国标规定了DPPHI和ABTS法测定多肽抗氧化性能的方法，适用于多肽体外抗氧化性能的测定。有需要该国标的可以加小编微信BioChenTech免费领取PDF版（加友请备注领取《多肽抗氧化性测定—DPPH和ABTS法》国标）。

ABTS法

ABTS法作为测定自由基清除能力使用最广泛的间接检测法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力的测定，ABTS在氧化剂作用下被氧化为绿色的ABTS·+，在734 nm或405 nm处具有特征吸收峰，抗氧化物存在时ABTS·+的产生被抑制使反应体系褪色，405 nm处吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比，通过吸光度下降的程度即可反映样本清除ABTS自由基的能力。

一、实验名称

XX体外清除自由基实验- ABTS法

二、实验目的

探究不同浓度XX体外清除自由基能力

三、材料方法：

1、仪器耗材：紫外分光光度计；ABTS；过硫酸钾；XX xx mg/mL。

2、实验方法：ABTS测试液的配制： ABTS储备液（7.4mmol/L,0.4mL）：取ABTS 0.0045g，蒸馏水 1.1025mL（MW=548.7）；K₂S₂O₈储备液（2.6mmol/L,1.43mL）：取K₂S₂O₈0.0025g，加蒸馏水3.575mL（MW=270.32），两者进行混合，黑暗室温静置12小时后用无水乙醇稀释50倍。A0 值检测：取1.6 mL 该ABTS 溶液和 0.6mL 无水乙醇充分混合后在734 nm 处检测吸收值。A 值检测：取1.6 mLABTS 测试液，同 0.6mL 梯度浓度的XX 充分混合后测 734 nm 处吸收值，实验独立重复三次。

ROS 清除率 = (A0 - A)/A0 * 100%

DPPH法

DPPH （2-2 diphenyl hydrazy）是一种稳定的自由基，分子内部存在有非共有电子（N·），当与电子以及自由基反应，会转化为稳定的结构（N-H）。DPPH在水溶液中显紫色，但是当自由基被清除，成为共价键结构后，颜色会转化为淡黄色。此时，我们便利用分光光度计，在515~517nm区间，进行测定，以此来对DPPH自由基清除能力进行判定。

作用机理

一、实验名称

XX 体外清除自由基实验 - DPPH 法

二、实验目的

探究不同浓度 XX 体外清除自由基能力

三、材料方法：

1、仪器耗材：紫外分光光度计；DPPH ；XX xx mg/mL。

2、实验方法：DPPH 测试液的配制：取DPPH 1 mg 溶于 20 mL 无水乙醇中，超声 5 min。A₀值检测：取2 mL该 DPPH 溶液和 1 mL 无水乙醇充分混合后在 519 nm 处检测吸收值。A 值测：取2 mL DPPH测试液，同 1 mL 梯度浓度XX充分混合后测 519 nm处吸收值，A_B值检测：取1.6 mL DPPH 测试液，同 0.6 mL水测 734 nm 处吸收值实验独立重复三次。

ROS 清除率 = (A0 - A+A_B)/A0 * 100%

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