自噬概念、过程、意义及常用检测方法

自噬是一种广泛存在于真核细胞的生命现象，具有吞噬病原体、调节炎症反应、减轻细胞凋亡、维持机体内环境稳态的作用。是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，藉此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬经历了：吞噬泡(phagophore)--自噬小体(autophagosome)--自噬溶酶体(autolysosome)三个过程。自噬影响多种细胞反应，如代谢平衡，细胞转归和炎症。在正常的生理反应或轻度压力下，自噬提供了一定程度的控制以促进生存，此时具有适应性。然而，在严重或慢性压力下，过度自噬活动或自噬不足可分别导致大量自身降解或有毒物质的积累;这些结果中的任何一种都是适应不良的，最终可能导致细胞死亡。所以总结一句：自噬对机体不是单纯的保护或者损伤作用。

常用的检查方法举例
1）Western Blot检测LC3
利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成。自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

2）透射电镜下观察自噬体的形成：
透射电镜下吞噬泡(phagophore)的特征为：新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。自噬小体(autophagosome)的特征为：双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(autolysosome)的特征为：单层膜，胞浆成分已降解。

3）测量自噬的降解产物——P62蛋白/ SQSTM1蛋白
P62是自噬降解产物的检查，P62是已知的的自噬蛋白，也称为SQSTM1蛋白，
具有底物的特异性，其作为一种调节因子参与自噬体的构成，在自噬的中晚期被降解，所以在细胞内整体P62水平的表达与自噬活性存在负相关。而LC3是目前最明确的贯穿整个自噬过程，并能出现在晚期自噬溶酶体中的自噬相关蛋白。

P62蛋白是自噬激活的标记物，LC3II增加，说明了自噬小体的增加，如果P62同时减少的，说明自噬活性增强，如果P62同时增加，说明自噬小体降解过程抑制，即自噬过程下游被抑制。