一、至今为止,应用于临床的常用抗体有几十种,在这当中又可分为两种类型。
1、浓缩型抗体
根据近几年来使用的情况认为,它有许多优点,但也有许多不足之处:
① 可作为各种疾病检测的常备抗体。
② 成本低,价格较便宜。
③ 需要稀释抗体,手续较为复杂。
④ 需要配置各型号的微量加样器,以利于量取精确的抗体量。
⑤ 需要具备一定的英语水平,因为浓缩型的抗体多为进口试剂,其使用书都以英文为主,其中涉入抗体的来源,适应让稀释对什么组织或细胞可起反应等。
2、即用型抗体。
近几年来,免疫组化技术应用的推广,即用型抗体的应用越来越受到人们的欢迎,根据几年来的使用,认为它有许多优点和不足:
① 使用方便。
② 对于不具备或基本不懂免疫组化技术的人,只要按照说明书的方法使用,也能获得理想的结果。
③ 不需要配置多种昂贵的微量加样器。
④ 特别适合于基层单位。
⑤ 价格较浓缩型抗体贵。
⑥ 即用型抗体不可作为常备贮存抗体。
二、抗体的适应症
在众多的抗体中,按它们的实际使用范围,把它们分为两个类:
1、适合于冰冻切片,涂片,细胞培养片。
2、适合于石蜡切片,冰冻切片,涂片和细胞培养片。
三、选择合适的单克隆或多克隆抗体
抗体除了分为上述的两个类外,从其克隆的高度讲,也有单克隆和多克隆之分。
1、单克隆抗体,在目前临床常用的抗体当中,大部分都是单克隆抗体。这要归功于生物技术的不断提高。在早些时候,应用于临床的抗体,大多数为多克隆抗体。
2、多克隆抗体,在临床应用的抗体中,还有少部分的抗体为多克隆抗体。
四、抗体的加入
这看似很简单的问题,如果处理不好也可导致不同的结果,如果应用自动免疫组织化学染色仪,将程序输入即可,如为手工操作,就必须注意以下的问题:
1、当PBS冲洗完毕后,在加入抗体,如一抗,二抗或三抗。必须将存留于切片上的多余的PBS摔干,但不能让切片干涸,切片干涸,往往可产生非特异性染色,切片上PBS存留过多,将会稀释加入的抗体,影响加入抗体的浓度,同时也将影响最后的结果,如假阴性等。
2、加入的抗体以一滴为佳。当擦干组织块周边多余的PBS后,切片保持着一定的湿润度,此时加入另外的抗体为最佳时候,滴入抗体以一滴50ml为好,加入后,轻微地摇匀地覆盖于切片上,使最后的结果稳定均衡,不至于有的地方有反应,有的地方无反应。
3、切片没擦好将会影响加入抗体的质量,切片没冲洗干净,没擦试好,当加入抗体后,它可缩于切片的一边,此时你为了使加入的抗体能够完全地覆盖整个切片,便会使劲地加入抗体,此时的结果是,抗体依然滑向一边,或者完全露出,这不光没达到目的,还浪费抗体,正确的做法就是彻底地用PBS冲洗,摔干切片擦干切片周边的PBS,再滴入一滴抗体轻轻摇匀即可。
五、选择合适的孵育时间
第一抗体的孵育时间,有较多的使用范围,应用于临床检测抗体的孵育时间。一般室温下孵育在30-60分钟,120分钟,对于研究性质的抗体孵育时间,也可按照上述的时间,但也有人提出于4℃冰箱中过夜孵育,根据我们的经验一般不主张于4℃冰箱中过夜,原因是:
1、长时间的孵育可以使一些非特异性的物质沉淀下来,或者被吸附,造成背景的染色。
2、目前销售的抗体,纯度较高,特异性较强,不需要长时间的孵育,也能够结合得很好。
3、长时间的孵育,较容易引起切片的脱落,造成染色的失败。
4、长时间的孵育,不利于临床病理报告的发出。
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