前言
腺瘤性息肉（APC）基因在结直肠癌发病的过程中起着重要的作用，但是针对其开发相应药物仍旧困难重重。长链非编码RNA是长度大于 200个核苷酸的非编码 RNA,是研究热点之一，在癌症的诊断治疗方面具有重要价值。
中山大学谢丹教授团队结合了这两者，近期在JCI上发表了名为“APC-activated long non-coding RNA inhibits colorectal carcinoma pathogenesis through reducing exosome production”的长文。他们通过对大量的结直肠癌（CRC）标本进行LncRNA微阵列分析，筛选并鉴定了出一个由APC基因激活的LncRNA（LncRNA-APC1）。LncRNA－APC1在预后不良的CRC患者表达降低，与淋巴结和/或远处转移呈正相关。APC可抑制LncRNA－APC1的启动子区PPARα的富集，从而减少LncRNA－APC1表达。此外，LncRNA－APC1通过直接结合Rab5b mRNA，降低其稳定性来减少外泌体的产生，这可直接抑制CRC癌细胞的增殖，转移和肿瘤血管生成。LncRNA－APC1敲除的CRC细胞来源的外泌体可激活内皮细胞MAPK通路促进血管生成。总而言之，LncRNA－APC1是APC调节CRC的关键性LncRNA。这些结果都提示LncRNA－APC1可作为未来可以去探索的治疗CRC的位点之一。
研究思路
Figure 1：将SW480/DLD-1过表达APC基因后进行lncRNA芯片测试，q-PCR验证可能受APC调控的lncRNA，从而筛选出lncRNA-APC1，发现lncRNA-APC1表达量高的CRC病人存活时间久。
Figure 2：双荧光素酶报告基因实验和CHIP实验验证了APC调控的lncRNA-APC1表达量高，部分原因是由于PPARα与lncRNA-APC1启动子区的结合。
Figure 3：无论是体内（肺部、肝部、脾脏转移结节）还是体外（CCK8），过表达lncRNA-APC1后，癌细胞生长受到了抑制，lncRNA-APC1对CRC肿瘤发生和转移具有抑制作用。
Figure 4：当作者WT APC和APC以及WT APC+敲减lncRNA-APC1的细胞来成瘤时，发现敲减lncRNA-APC1可以部分逆转改变APC的影响，证明APC的功能部分依赖于lncRNA-APC1。
Figure 5：那么lncRNA-APC1到底如何抑制癌细胞生长呢？作者们发现lncRNA-APC1的表达导致肿瘤组织明显坏死，而β-catenin和 c-Myc没有任何变化。作者们还发现过表达lncRNA-APC1后微血管明显减少，说明lncRNA-APC1通过抑制肿瘤血管生成抑制CRC细胞肿瘤生长。
Figure 6：那么lncRNA-APC1是否会影响血管生成的某些重要基因的表达，如：VEGFA, EGF, PDECFG, ANG1, ANG2, and TGF-β1等，但结果并无差异。lncRNA-APC1过表达细胞外泌体量明显减少，证明lncRNA-APC1可以减少癌细胞内外泌体的含量。
Figure 7：作者想验证lncRNA-APC1是否真的通过外泌体来抑制血管生成。lncRNA-APC1过表达细胞株收取上清中外泌体，加入至HUVECs，发现微管形成减少。lncRNA-APC1敲减的HCT116上清中的外泌体职能刚好相反。
Figure 8：lncRNA-APC1通过Rab5b减少CRC外泌体的产生。q-PCR和WB显示lncRNA-APC1高表达时，Rab5b表达量减少。当用敲除Rab5b的细胞系建模时，肿瘤大小明显减小。
Figure 9：沉默或者敲低lncRNA-APC1 / Rab5b后的CCK8和Transwell实验证实了lncRNA-APC1沉默可通过Rab5b促进CRC细胞的增殖和迁移。
Figure 10：通过生信分析器，Rab5b mRNA 和lncRNA-APC1具有潜在的结合位点，RIP 实验证实了lncRNA-APC1可与Rab5b mRNA相互作用，降低其在CRC中的稳定性。
Figure 11：Western blot检测显示，来自lncRNA-APC1的外泌体沉默后激活HUVECs中的MAPK通路，毛细管形成和Tranwell侵入试验都验证外泌体通过激活内皮细胞内MAPK通路促进肿瘤血管生成
Figure 12：WB显示CRC来源外泌体富含Wnt1，而干扰Wnt1后lncRNA-APC1并无改变，体外Wnt1缺失的细胞来源外泌体，促进肿瘤生长的功能减弱，但是t细胞因子/淋巴样增强因子(TCF/LEF)水平并无明显差异，这说明外泌体Wnt1可能通过非经典Wnt信号通路促进CRC细胞增殖和迁移。
结论
如上图：本报告首次明确lncRNA-APC1是APC功能的重要中介，通过直接调控Rab5B mRNA的稳定性，从而降低CRC细胞外泌体的产生。此外，研究结果显示,CR来源的外泌体通过lncRNA-APC1 / Rab5b轴强有力地影响CRC发病机理和/或血管生成，而APC信号也可以独立于β-catenin和经典的Wnt信号通路发挥其作用。
参考文献：Wang FW, Cao CH, Han K, Zhao YX, Cai MY, Xiang ZC, Zhang JX, Chen JW, Zhong LP, Huang Y et al: APC-activated long non-coding RNA inhibits colorectal carcinoma pathogenesis through reducing exosome production. The Journal of clinical investigation 2018.
全文链接：
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