细胞污染

一、细菌污染（较容易被发现）

二、霉菌感染 （较容易被发现）

三、支原体污染（难被发现）

四、黑胶虫污染

五、病毒污染

六、交叉感染

一、菌类污染

菌类污染通常是操作不规范或无菌措施不到位等引起的，这类污染通常容易观察。

1、细菌污染：

细胞污染后的变化：

①污染后由于有大量酸性物质产生，因此培养基会短时间内由红色变为黄色；

②由于细菌大量增殖，培养基变浑浊，稍微震荡后可见培养基表面有漂浮物；

③普通倒置显微镜高倍镜观察，胞浆内可见大量颗粒；

④细胞生长缓慢，逐渐变圆脱落。

细菌污染种类：白色葡萄球菌，大肠杆菌，假单胞菌、枯草杆菌等。

应对措施：通常，我们在培养基中添加青链霉素预防细菌污染。细胞一旦污染后，应立即排查污染源，更换所有的试剂耗材。细胞遭受污染后一般不具有抢救价值，灭活后予以丢弃。

二、霉菌污染

细胞污染后的变化：

①一般来说，培养液不会变浑浊；

②比较容易发现，肉眼可见点状菌落（淡黄色或者白色）漂浮在培养基表面；

③普通倒置显微镜下观察，可见絮状交错的菌丝或菌团生长在细胞之间；有时真菌并不是直接分布于细胞贴壁层，需要通过调整显微镜仔细观察寻找菌丝或菌团。

应对措施：由于真菌和细胞的生理特性类似，通常不在培养基中添加相应的抗生素进行预防。细胞一旦发现被真菌污染，应立即查找污染源，进行清理消毒。在无法控制的时候，需对整个培养室进行全面消毒。

三、支原体污染

支原体污染是最麻烦的，通常来源有这几个1、已受污染的细胞2、操作人员的疏失3、已受污染的培养基、血清4、操作环境不良、实验器具不洁等。由于支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。

细胞污染后的变化：

①培养液不变浑浊，但会很快变成黄色；

②多数细胞在形态方面少有明显变化；

③在倒置显微镜下可见胞浆出现小颗粒或空泡；

应对措施：细胞证实支原体污染后，应立即查找污染源，进行排除。细胞建议直接丢弃。若想挽救，可利用支原体没有细胞壁，对四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮抗生素敏感的特点来去除。

四、黑胶虫污染

引起原因：往往来源于血清；

细胞污染后的变化：

①低倍镜下观察时可见黑色小点，高倍镜下可见到其做布朗运动，像小虫游来游去；

②细胞培养液仍然清亮，污染较轻时对细胞无影响；若太多就会对细胞造成影响。

应对措施：建议不是很珍贵的细胞，就直接丢弃。

五、病毒污染

引起原因：病毒可能来自于血清；

细胞污染后的变化：

①污染后培养液无明显变化；

②大部分细胞也不会有明显的形态变化；

应对措施：对于黑胶虫的预防，只能采用高品质的血清。

六、交叉污染

引起原因：两种或两种细胞以上的实验同时进行，实验器具、试剂等混用而易造成的污染，这就纯属个人原因了，所以我们在试验的时候一定要做好防护，按标准操作

应对措施：为了避免细胞间的交叉污染，培养过程中，所有器具和试剂要严格区分，不能混用。细胞按照生长特性进行顺序、单独操作。所有细胞株在早期保存种子。

总：细胞发生污染后，任何一种挽救细胞的处理都可能对细胞产生未知的影响。因此，不到万不得已，不必施救。